家福捕鸟蛛毒素子多样性和活性分析.pdf

摘要 家福捕鸟蛛(Selenocosmia jfafu)是一种生活在中国广西、云南 等地的蜘蛛新种。该种蜘蛛中等个体，产毒量较大和毒性较强。它的 毒液中含有许多不同生物学活性的成分，为了更好地开发利用该种生 物资源，我们对其毒素进行了初步的研究。 首先，对家福捕鸟蛛粗毒的组成和活性进行了分析。采用反相高 效液相色谱和基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱对家福捕鸟蛛 粗毒的多样性进了分析。结果表明：家福捕乌蛛粗毒经反相高效液相 色谱分离后得到40多个色谱峰，经质谱鉴定得到238个多肽分子， 且多肽分子量呈现出双峰分布，其中62．5％多肽分布在3000至4500 Da之间，33．2％多肽毒素分布1000．3000Da之间。这种分子量的分 布模式不同于其它塔兰图拉蜘蛛粗毒中多肽的分布模式。聚丙烯酰胺 凝胶电泳分析结果表明：除了分子量在10000Da以下的分子，粗毒 鉴定，主要是一些血蓝蛋白、钾离子通道蛋白、角蛋白、钙蛋白酶等。 虽然粗毒对美洲蜚蠊的半致死剂量为85．90“g／g体重，但粗毒对小鼠 毒性不明显，当注射剂量达到10mg／kg体重时小鼠没有发现明显的 中毒症状。采用全细胞膜片钳技术，测定了家福捕鸟蛛粗毒对DRG 细胞电压门控钠、钾和钙离子通道的活性。结果表明：粗毒对DRG 细胞上河豚毒素敏感型钠通道、河豚毒素不敏感型钠通道、电压门控 钾通道、高电压激活钙通道和低电压激活钙通道都具有抑制作用。100 万方数据 3．8％河豚毒素不敏感型钠电流、44．2％4-5．3％电压门控钾电流和 77．7％4-9．9％低电压激活的钙电流。50舭的粗毒能够抑制大约 74．9％4-2．8％高电压激活的钙电流。结果表明家福捕鸟蛛粗毒中可能 存在开发为新型药物和离子通道工具试剂的毒素分子。 其次，为了阐明家福捕乌蛛毒素分子的多样性和遗传进化机制， 我们对家福捕鸟蛛毒腺的转录组进行了研究。通过提取家福捕鸟蛛毒 腺建立eDNA文库，随机挑取单克隆进行测序，得到752个高质量的 EST序列。这些EST序列去冗余后得到257个唯一序列，其中包括 条，占整个序列的58．24％，与通常细胞蛋白有关的序列220条，占 有匹配到相似的序列或者相似性非常低。438条毒素序列去冗余后得 到159条全长的毒素前体肽(含有信号肽，富含酸性氨基酸的中间肽 和成熟肽)。利用MEGA5．2软件构建家福捕鸟蛛毒素超家族进化树。 家福捕乌蛛159条前体肽毒素分子分为17个超家族，分别为超家族 对这17个超家族的毒素分子的结构和功能进行了分析。另外，对家 福捕鸟蛛毒腺转录组中普通细胞蛋白转录子进行了KOG基因注释， 鉴定得到了一些与家福捕乌蛛毒腺毒液分泌和重要生理过程有关的 基因。 最后，从家福捕鸟蛛毒液中分离纯化得到了5个毒素分子(JF8、 II 万方数据 用。 关键词：家福捕乌蛛，cDNA克隆，蜘蛛毒素，电压门控钠通道，活 性筛选 III 万方数据 ABSTRACT Selenocosmia identifiednew of jiafu假jiafu)isrecently species in mediumbodiedvenomousare spiderP．R．China．These spiders in areasofsouthwestof at distributed the China，mostly mainly hilly and Province．Thevenomofthis