家蚕s3a基因克隆、亚细胞定位及功能研究.pdfVIP

^．-，{， 一0■ IIlll l I JillI l l lll[IIII Y1735257 摘 要 nuclear 家蚕核型多角体病毒∞m蛳mori polyhedrosis 毒史上最早发现的，对养蚕业危害最为严重的传染病病原之一。 本项目的前期研究通过荧光差异显示技术，比较分析了家蚕(Bombyxmori)对 均表达，但在抗性品系和近等基因系中的表达高于感性品系，并且添毒处理可促进该 基因的表达。本研究对该基因进行序列分析、原核和真核表达、转基因表达、亚细胞 定位及其与抗性的相关功能进行了研究，结果如下： 1．根据Bms3a的序列设计特异引物，通过PCR扩增方法获得该基因编码框序列， 其ORF为792 bp，编码263个氨基酸，其氨基酸序列与人的同源性为70．1％，与果 到表达。 2． 段与EGFP报告基因融合，用杆状病毒表达系统构建了2种重组病毒： 在细胞质内。 3．为研究过表达Bms3a对家蚕幼虫的影响，将重组病毒注射家蚕幼虫，调查幼 虫成活时间及成活率并进行统计学分析，结果显示重组病毒感染幼虫的存活时间明显 延长，说明过量表达S3a可能抑制病毒的复制。 ● 转染家蚕细胞，获得了带有绿色荧光的转基因家蚕细胞。以BmNPV出芽病毒BV感 r’ 伊 染Bms3a的转基因细胞系，对细胞中的多角体进行计数，结果发现在转基因细胞中 { 多角体的数量显著地比正常细胞中少，说明s3a的高表达可能抑制病毒在细胞中增 殖。 的细胞有抑制病毒在细胞中增殖的作用，而且以重组Bms3a病毒侵染家蚕其存活时 间要明显长于对照组。本文的研究为揭开Bms3a基因的功能及家蚕抗NPV的机理提 供了一定的理论基础。 关键词： Bms3a，亚细胞定位，过表达，转基因，感染性，家蚕核型多角体病毒， BEVS n Abstract the insectvirus morinuclear first Bombyx polyhedrosisvirus(BmNPV)was is themostserious discoveredin silkworm diseaseoneof history,In industry,BmNPV hazardofthreevirusdiseases． ^ 一 fluorescentdifferential ininitial Using display(FDD)techniquestudy,weanalyzed differential of relatedtoBmNPVresistance resistant expressiongenes amonghighly