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康氏木霉AS3．2774纤维素酶系的诱导、阻遏、纯化及鉴定研究 摘要 D E．C 分为三类：葡聚糖内切酶(1，4…13glucanglucanohydrolase3．2．1．4)，葡聚糖外切 E．C 酶(1，4-p—D-glucancellobiohydrolase 3．2．1．21)。本论文以康氏木霉(Trichodeerma 康氏木霉纤维素酶系的发酵条件，纤维素酶系的代谢调控，纤维素酶系的分离纯化方法， 酶系组分的生物学功能鉴定进行了系统研究，结果如下： 1、通过康氏木霉AS3．2774固体发酵纤维素酶的单因素及正交试验研究，得出最 优发酵条件为：发酵温度28。C，稻草粉(40目)8 mL， g，麸皮为4g，培养基含水量23 IU，mL。 每天翻曲1次，发酵周期4．5天，在此在条件下，康氏木霉产纤维素酶活力达0．38 2、通过研究糖蜜酒精废液对康氏木霉发酵纤维素酶的影响，发现用15”BX的糖蜜 酒精废液配制的培养基，康氏木霉发酵纤维素酶的滤纸酶活力是对照的8．6倍，达3．3 IU，mL。 3、经分离纯化，从糖蜜酒精废液中得到对康氏木霉发酵纤维素酶具有促进作用的 活性物质A俐A10是一种新型多糖，一分子Alo含有6个鼠李糖分子、17个木糖分子、4 Da左右。 个果糖分子以及2个葡萄糖分子，分子量为4，200 4、通过对康氏木霉AS3．2774的碳源代谢调控研究，发现其纤维素酶系是一组诱 导酶，可以通过诱导物(纤维素或Alo)与阻遏物(纤维素酶酶解纤维素末端产物葡萄 糖)进行代谢调控。康氏木霉在基本发酵培养基Ⅲ(配方为：稻草粉8 g，麸皮4g，自 来水23 IU／mL。若 mL，自然pH)产纤维素酶属于一般性诱导，纤维素酶活力达0．38 将基本发酵培养基IⅡ中添加2．0 g葡萄糖，则成为高度阻遏培养基V，纤维素酶活力仅 为0．11lU，mL。若将基本发酵培养基Ⅲ中自来水替换为15”BX废糖蜜23mL，则成为 高度诱导培养基Ⅳ，纤维素酶活力高达3．31U／mL。 5、经发酵动力学研究，发现康氏木霉AS3．2774的发酵纤维素酶属于菌体生长与 产物合成非偶联类型(Ill型)，纤维素酶合成速度与碳源利用也不存在定量关系，而且 情况很复杂。在不同的培养基上呈现不同的特点，引起生物量、纤维素酶产物比生产率 I 和菌体形态分化差异。其中，在诱导培养基Ⅳ中，菌丝体比重较大且饱满壮实，孢子比 重较小，生物量较少，纤维素酶产物比生产率较快；在一般性诱导培养基Ⅲ中，菌丝体 比重较小且易衰竭，孢子比重较大，生物量较多，纤维素酶产物比生产率较慢；康氏木 霉在阻遏培养基V发酵过程中，出现两次产物比生产率的增速过程，但幅度比诱导培养 基低，体现阻遏解除的机制。 6、康氏木霉AS3．2774的纤维素酶的代谢调控实质基因水平的诱导与阻遏，是纤 维素酶蛋白在合成“量’’上的调节，二者胞外蛋白差异十分显著，其中被诱导的纤维素 酶胞外蛋白是被阻遏的纤维素酶胞外蛋白的38倍以上，体现康氏木霉优先利用现有资 源的进化机制。 7、论文研究了“聚丙烯酰胺凝胶活性电泳电洗脱二步循环法分离康氏木霉纤维 V，电流2∞0 4％-8％；胶长180mm；浓缩胶电压，80-100 mA；分离胶电压180-200 96 V