碱蓬、盐角草超化物歧化酶(SOD)基因的克隆和功能分析.pdfVIP

捅要 土壤盐渍化严重影响农作物的生长和产量，是限制农业生产的主要因素之一。我 国是世界盐碱地大国之一，盐碱地分布广泛，面积约O．346亿hm2。因此，如何利用 和开发这些盐碱地资源，提高作物产量已成为迫切需要解决的问题。目前，通过生物 技术方法分离植物耐盐基因并在转基因植物中表达，培育耐盐作物新品种，已经成为 改良土壤盐碱地的有效手段。超氧化物歧化酶(SOD)是一种广泛存在于动植物、微 生物中的金属酶，是机体内活性氧清除系统中的重要抗氧化酶类。研究发现，植物体 内SOD酶活性的高低和植物的抗逆性密切相关，而且过表达SoD基因能明显提高植 物对盐胁迫的抵御能力。本论文选取碱蓬、盐角草和盐芥三种盐生植物为材料，采用 构建原核表达载体，并在大肠杆菌中表达；将重组菌在不同NaCl浓度的液体LB培 养基中诱导表达，通过测定OD枷值来分析5个SOD基因的耐盐功能。研究结果如 下： 胶树的序列相似性为84％。转运肽和亚细胞定位分析表明其可能为线粒体SOD基因。 推测编码233个氨基酸，分子量约为25．7 KDa。其氨基酸序列与陆地棉的序列相似 性为83％，与紫杆柳的序列相似性为81％。转运肽和亚细胞定位分析表明其可能为 985bp，开放阅读框为684bp，推测编码228个氨基酸，分子量约为23．2KDa，蛋白 因。 并转化大肠杆菌EcD矗BL2 条带大小与预期一致，目的蛋白均成功表达。 3．考虑到高浓度口TG会对重组菌生长产生抑制作用，我们对pTG浓度进行优化， 以确保SOD基因既能够表达，又不影响重组菌的生长状况。通过实验我们选取0．025 n吐订为DTG的最佳浓度。将初始量相同的重组菌接种到6．5％，7％，7．5％，8％NaCl l；0眦，O．025m】MDTG)中培养，测定OD600值。结 浓度的液体LB培养基(50mg·L‘1 BL21 BL21 果发现重组菌 @ET30“SeMSD)和 BL21(pET30a／SsMSD)、 耐盐方面可能具有重要作用。 关键词：碱蓬，盐角草，超氧化物歧化酶，克隆，耐盐性 II ㈣舢㈣Ⅲ㈣㈣㈣ Y2149968 Abstract Soil haSs耐ollse疵cton and oneofⅡ1e sal越坝砌Ch cmpgrowmyield’is n坷or w址Chhave area f．aCtorS isoneof也eco州es l砌thlga酣cl删produCtion．C№a la玛e ofsalille．all湖i SaliIle．au!(alisoil itSmaC0mesto34．6面mon soil，ale is诵de印read，and to thesaline—all【alisoilresource锄dincre硒e也e hm2．Sohowdevelop a【ld havebecomean isoladonsan-tolerance ul苫entproblem．Atp