《8型AAV重组病毒介导的凝血因子的基因表达》.pdfVIP

ResearchPapers 研究报告 生物化学与生物物理进展 ProgressinBiochemistryandBiophysics 2007,34(1):80~86 型 重组病毒介导的凝血因子的基因表达* 8 AAV 1)** 1) 1) 2) 曹佐武 李观贵 梁郁强 何冬梅 1) 2) (暨南大学生命科技学院，广州 510632； 暨南大学血液病研究所，广州 510632) 摘要 8型AAV重组病毒载体是新型的基因转移载体，能高效转染肌肉细胞和肝细胞.AAV转染细胞的效果与注射病毒的 途径有很大关系.与门脉注射和肌肉注射相比，经腹腔注射的rAAV8病毒能经血液循环转运到全身其他组织器官，形成更加 10 广泛和持久的基因转导.通过腹腔途径把510gc的8型重组病毒载体注射到小鼠体内，2周后，小鼠血浆中有明显的基因 × 表达，1个月至2个月期间多数小鼠表达量达到高峰，然后表达水平下降，直到4个月后血浆中尚维持明显的表达量.凝血 实验显示，表达的人凝血因子 具有生物活性.免疫组化实验显示，病毒载体已进入体内多组织器官中表达.说明8型AAV Ⅸ 病毒载体经腹腔注射后已经血液循环运送到其他组织，并在肌肉、肝脏、肾脏和心脏等器官明显表达，表达产物具有凝血 活性. 关键词 腺相关病毒，腹腔注射，凝血因子 学科分类号 R394.8 腺相关病毒 (adeno-associatedvirus，AAV)是 感染效率相对较高,而对于其他组织细胞的感染效 单链DNA微小病毒，是一种复制缺陷性病毒.它 率相对较低.这限制了它在基因治疗中的应用. 的复制需要辅助病毒如腺病毒的协助.AAV病毒仅 8型AAV是从灵长类动物新分离出的腺相关 [1] 由三个核外壳蛋白和一条DNA单链构成，不含 病毒血清型 .8型重组AAV病毒(rAAV8)载体能 酶、酯类及碳水化合物. 更有效地转染肌肉和肝脏等组织器官，而且实验显 AAV基因组的两端为 145个碱基的倒转末端 示，经腹腔注射能经血液循环转运到其他组织器 [2] 重复序列(ITR)，其间是2个开放性阅读框，分别 官 . 编码与AAV复制相关的Rep蛋白和病毒外壳蛋白 人凝血因子 (hF )是肝脏合成的，前体蛋 Ⅸ Ⅸ Cap蛋白.重组腺相关病毒(rAAV)去掉了野生型 白是461个氨基酸的单链血浆酶原，其基因位于X AAV自身的基因，仅留下其基因组两端的反向重 染色体远端，1.383kb的编码区编码415个氨基酸 复序列ITR，其间插入需要表达的目的基因. 的肽链.凝血因子 通过水解激活后形成F a.凝 Ⅸ Ⅸ AAV病毒具有安全性高、免疫原性低、物理 血因子 的表达缺陷导致凝血障碍，临床上表现为 Ⅸ 性质稳定、感染细胞谱广等优点.此外，AAV病毒 乙型血友病，这是一个利用AAV病毒广泛进行基