HPV+L1共同保守序列多肽多价性HPV阳性临床标本检测.pdfVIP

内 容 摘 要 本实验研究目的是证实HPVL1 主要衣壳蛋白的448-477 氨基酸序列是HPV6、11、 16、18 等亚型的共同保守序列。我们用合成的 HPV16 L1 的这 30 个氨基酸序列的短 肽加完全弗氏佐剂皮下注射免疫Balb/c 小鼠和日本长耳大白兔，获得其免疫的抗短 肽血清。然后用PCR 对收集的临床标本进行HPV 检测。41 例标本包括 15例尖锐湿疣、 6 例寻常疣、5 例原位癌和 15例宫颈癌。检测出HPV6 型 12例，HPV11 型3 例，HPV16 型 11例，HPV18 型 1例，HPV16 合并HPV18 型3 例，其他型别5 例。然后用ELISA、 Western blot、免疫组化这三种方法检验已获得的抗 HPV 短肽血清抗体能否与多型 HPV 进行反应。结果显示，在ELISA 实验中，HPV6，11，16，18型及其它型阳性的临 床标本的抗原抗体反应均为阳性；Western blot 实验中，HPV 各型别阳性的临床标本 均在 56KD 处出现显色条带，而阴性标本没有；免疫组化结果发现，不同病变性质的 组织反应各有特征，阳性反应仅出现于上皮之内，呈区域性，有明显界限。结果表明 了此短肽与弗氏完全佐剂合用免疫动物后获得的高滴度抗体能与 HPV6，11，16，18 型及HPV 其他型别相应抗原物质发生反应。通过此短肽免疫的抗体在HPV6，11，16， 18 间存在交叉性，证实了我们寻找的HPVL1 表位确实是HPV 共同表位，其免疫形成 的抗血清能与多型别HPV 发生反应。表明L1aa448-477 具有制成广谱疫苗的潜力及建 立广谱性短肽疫苗的的可能性。此外，以此短肽为抗原，对动物进行免疫接种诱导抗 短肽抗血清，可检测多型别的HPV 感染，可用于宫颈癌、尖锐湿疣等的大规模筛查。 关键词：人乳头瘤病毒（HPV） 宫颈癌 尖锐湿疣 寻常疣 共同序列多肽（HPV common sequence peptide，HPVCSP） 共同表位 II Abstract The object of this study was to testify that the region of AA 448-477 of HPV-16 major capsid protein, L1 is a common conserved sequence of human papillomavirus types 6, 11, 16, 18 and so on. We immunized Balb/c mice and Japanese long-ear albino rabbit with this synthetic peptide with this 30 AA HPV 16 L1 sequence added Furend`s complete adjuvant by hypodermically injection, and got the antiserum. Then, we used the method of PCR to identify the HPV type in clinical specimen. It was 41 case and among the total it contained condyloma acuminatum (n=15), verruca vulgaris (n=6), cancer in situ (n=5) and cervical cancer (n=15). The HPV types identified were HPV6 (12/41), HPV11 (3/41), HPV16 (11/41), HPV18 (1/41), HPV16 and HPV18 (3/41), and the other HPV type (5/41). At last, we tested whether the serum antibody of anti HPV shore peptide could react with these types of HPV by ELISA ,Western blot and immunohistochemistry, what showed that this short-peptide adding Furend`s