《紫外光照下辣根过氧化物酶酶活变化及机制2016年论文》.pdfVIP

第 36卷 第 3期 大 连 大 掌 学 报 、，0l-36No-3 2015年 06月 J0URNALOFDALIAN UNIVERSITY Jun．2015 紫外光照下辣根过氧化物酶酶活变化及机制 曹洪玉-，一，王 珍 ，一，唐 乾 ，一，郭相金2一，郑学仿 2，， (1．大连大学 生命科学与技术学院，辽宁 大连 116622；2．辽宁省生物有机化学重点实验室 大连大学，辽宁 大连 116622 3．大连大学 环境与化学工程学院，辽宁 大连 116622) 摘 要：实验发现不同波长光对辣根过氧化物酶 (HRP)酶活的钝化程度不同，我们采用紫外、荧光及圆二色 (CD) 等方法对光还原导致酶活变化及其机制进行研究。结果显示，280nnl单色光照射HRP溶液60min后 ，酶活降为72．81％， 403nlTl单色光照射HRP溶液同样时间后，酶活仅为未光照时的56．34％。紫外光谱证实光照使辣根过氧化物酶中的 铁被还原，导致HRP钝化。同步荧光和CD光谱表明光还原后蛋白内色氨酸残基微环境的极性增加，403nln单色光 照射使血红素构象发生改变，光照时间内蛋白未变性。根据以上数据可知，两种单色光诱导HRP还原钝化机理不同： 280nln单色光激活色氨酸丢失电子，血红素中铁得到电子被还原；403nnl单色光则激发卟啉环分子内电子转移致使 铁被还原 。 关键词：辣根过氧化物酶；紫外光照射；酶活；光还原 中图分类号：0647．2 文献标识码：A 文章编号：1008．2395(2015)03．0076．08 收稿 日期：2015．04．14 基金项目：国家自然科学基金项目20871024)；辽宁省教育厅项 目(L2013470，L2013471)。 作者简介：曹洪-~(1981．)，男，讲师，研究方向：蛋白质结构与功能，药物分子设计。 通讯作者：郑学仿(1964．)，男，教授，博士，研究方向：生物大分子结构与功能。 血红素蛋 白是一大类含有原卟啉Ⅸ作为辅基的 化活性不高的复合物III(亚铁过氧化氢酶)和复合物 金属蛋白，在生命体中承担着不同的重要的生物学功 II(FeⅣ过氧化氢酶)】【oJ；细胞色素b2经紫外C段 能，由于蛋 白含有特殊的共轭结构，因此可吸收特定 光光照后酶活钝化，其色氨酸、酪氨酸残基和血红素 波长的光改变其本身状态 [1,2J。辣根过氧化物酶 均发生了轻微变化…J。 (HorseradishPeroxidase，HRP)是以铁卟啉为辅基的 在实验中，我们进一步证明了紫外光照使 HRP 血红蛋 白，HRP的肽链含有 308个氨基酸，酶中有4 钝化，发现不同的波长在相同时间内对酶活的钝化程 个有二硫键 ，同时还存在一个 由Asp99和Arg123组 度不同。文献研究中尚未阐明氨基酸和卟啉各 自的特 成的盐桥。通过卟啉中铁原子的其中一个轴向结合点 征吸收波长光对卟啉和蛋 白功能的影响及机理。因此 与 170位组氨酸咪唑环的N原子结合，使卟啉垂直 本文运用UVVis吸收光谱、UV-Vis时间光谱、同步 连接在 Hisl70上；而铁的另一个轴 向配位点在静态 荧光光谱和圆二色光谱等方法，分别研究了常温下色 酶中暂时为空，在 H2O2环境下，这一结合点就能与 氨酸特征吸收光280nlTl和卟啉特征吸收光403nIn两 一 氧化碳、氰化物或叠氮化物等小分子结合。辣根过 种单色光照射 HRP，总结光照对酶活的影响并分别 氧化物酶能利用过氧化氢氧化一些有机和无机化合 提出其光还原机制。 物，它与植物的呼吸作用、光合作用及生长素的氧化 等都有密切关系。辣根过氧化物酶在生物传感器 3【】、 1 实验部分 环境监测、工业应用4【】等方面也发挥了很大的作用， 广泛地运用于基因学、生理学及病理学研究中L5，6J。