二甲双胍和甘精胰岛素对人子宫内膜癌Ishikawa细胞株增殖作用影响相关机制与研究.pdfVIP

摘要 IMII IIIIIlUIIIIIllllllltlIIlUllIIIlUI 摘要 Y2427241 研究背景和目的： 二甲双胍是一种经典的降糖药物，被国内外多个权威糖尿病学术组织(如 性已得到广泛的认同．近年研究显示，二甲双胍具有抑制肿瘤生长的作用，而其 具体作用机制尚不完全清楚【l】。胰岛素类似物作为传统胰岛素替代物，能够较好 的模拟生理胰岛素分泌模式，因而在临床上广泛应用。其中，甘精胰岛素在分 子结构上的改变与胰岛素样生长因子．1(IGF．1)分子具有同源性，体外研究显 示[21，促有丝分裂作用是人胰岛素的8倍。既往有研究显示，甘精胰岛素可能增 加肿瘤风险13]。临床治疗中，长效胰岛素类似物与双胍类药物联用是常见的治疗 方案。二者联合除了血糖平稳达标的优势外，是否能够在糖尿病患者恶性肿瘤 的发生风险中发挥正面作用，是临床医生及科研工作者值得思考的问题。 本研究通过探讨二甲双胍、甘精胰岛素及二者联合对子宫内膜癌Ishikawa 细胞株增殖、凋亡及雷帕霉素靶体蛋白(m，rOR)基因表达的影响，从细胞和基 因水平分析二甲双胍和甘精胰岛素对子宫内膜癌生长及增殖的影响，并观察二 甲双胍是否能够抑制或阻断甘精胰岛素促肿瘤细胞增殖的作用。从而为合理选 择临床降糖治疗方案，更加合理的使用胰岛素及其类似物提供实验基础，亦可 为进一步探讨降糖药物的抑癌机制提供一些参考。 研究内容和方法： 1、细胞培养：人子宫内膜癌Ishikawa细胞常规培养、扩增、传代。 2、实验分组及药物干预：取对数生长期的Ishikawa细胞，不同浓度二甲双胍、 甘精胰岛素及二者联合干预不同时间；对照组加入等体积不含药物培养液。 3、CCK．8试剂盒检测细胞增殖。 4、流式细胞仪检测细胞凋亡。 5、荧光定量PCR测定雷帕霉素靶体蛋白(mToR)基因表达量。 6、统计学处理：数据用￡±s表示，应用SPSSl7．0统计软件，多组间比较进 行单因素方差分析，两两比较进行LSD．t检验，P0．05为差异有统计学意义。 II 摘要 结果： 1、不同浓度组甘精胰岛素、二甲双胍及两者联合对细胞增殖的影响 1．1不同浓度甘精胰岛素处理不同时间后，与对照组相比，各干预组均有不 同程度增殖，不同时间增殖幅度差异不大(尸O．05)，不同浓度之间增幅差异有 统计学意义(尸0．05)。 1．2不同浓度二甲双胍处理不同时间后，与对照组相比，各干预组增殖率明 显降低，其下降幅度与药物浓度和干预时间成正相关。差异有统计学意义(P O．05)。 1．3100IU／L甘精胰岛素作用72h后分别加入不同浓度二甲双胍干预24h，与 甘精胰岛素干预组及对照组相比， 增殖幅度大幅下降，其下降程度与二甲双胍 干预浓度呈正比，差异有统计学意义(PO．05)。 2、不同浓度组甘精胰岛素、二甲双胍及两者联合对细胞凋亡的影响 二甲双胍组较甘精胰岛素组有更高的凋亡率，二甲双胍浓度越高，其凋亡率 越高，差异有统计学意义。甘精胰岛素各浓度组间差异不明显，但对细胞晚期 凋亡率的影响更大。甘精胰岛素联合二甲双胍组显示二甲双胍在甘精胰岛素环 境下仍可明显促进细胞凋亡，其程度与二甲双胍浓度成正比，差异有统计学意 义(P0．05)。 3、不同浓度组甘精胰岛素、二甲双胍及两者联合对mTOR基因表达量的影 响 与对照组相比，甘精胰岛素组mTOR基因表达明显升高，与作用浓度成正 比，差异有统计学意义。中、高浓度二甲双胍组mTOR表达较空白对照组有所 等浓度相比，差异并不明显(P0．437)。 结论： 1、二甲双胍在体外可以较大幅度抑制人子宫内膜癌细胞增殖，促进其凋亡， 降低mTOR基因表达。其程度与药物干预浓度及作用时间相关。 2、甘精胰岛素在体外可一定程度上促进人子宫内膜癌细胞增殖，降低细胞 凋亡率，与药物浓度呈正相关，与作用时间关系不显著。甘精胰岛素可在一定