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生物标识荧光染料及游离基氯化反应的研究 捅矍 本论文的主要工作是合成了四个用于生物标识的荧光染料，以及对游离基氯取代苯 环上硝基和游离基氯取代苯环上甲基氢的的相对反应速度进行了研究。 第一：采用了一种实用的路线合成提纯6一羧基荧光素化合物。本文采用间苯二酚或 4一氯间苯二酚和偏苯三甲酸酐缩合得到5一位和6一位羧基荧光素异构体。荧光素类衍生 物由于在普通溶剂中的溶解性很差，并且存在内酯环和游离羧基两种状态，增加了分离 提纯的难度。上面介绍的两个缺点能够通过在毗啶溶液中和特戊酰氯反应得到特戊酰氯 的羧基荧光素而解决，特戊酰氯的羧基荧光索重新溶解在乙醇中，加入二异丙胺，特戊 酰基的6一羧基荧光素二异丙胺盐(特戊酰基的2’，77—6一羧基荧光素二异丙胺盐)在 乙醇中析出来。在稀盐酸中水解，和N，N’一二琥珀酰亚胺碳酸酯反应得到相应的NHS 酯，能够直接用于蛋白质标记。 第二：合成了两个新的BODIPY染料。对羧基苯甲醛或对羟基苯甲醛和2，4一二甲基 吡咯缩合得到二毗咯的甲基化合物，在四氯苯醌的条件下脱氢得N--pH：咯的亚甲基化合 物。再与三氟化硼和三乙胺反应后得到总收率为9．6％羧基BODIPY染料和总收率为35．7％ 核酸。 第三：对两类游离基氯化反应的相对反应速度进行了研究。实验结果表明游离基氯 取代苯环上硝基的速度比游离基氯单取代苯环上甲基氢的速度慢，但是比游离基氯二取 代苯环上甲基氢的速度快。 7一二琥珀酰亚胺碳 关键词：荧光染料；游离基氯化：羧基荧光素；特戊酰氯；N。N 酸酯；四氯苯醌：蛋白标识；寡核苷酸标识；游离基氯化 生物标识荧光染料及游离基氯化反应的研究 Abstract Inthis different thesis，four fluorescentfor dyes labelingbiotogical havebeen free molecules andthemechanismof redicalchlorination synthesized have been ofnitrotoluenesinvestigated． and reliablemethodforthe of FirstlY：Aprattical production multfgram of fluoresceinisdescribed．TheSOlubiliof carboxy quantities poor cY and derivativestheirexistenceaslaetoneorfree fluorescein acidtautomers 5一and6一isomeric ofthe are separation．Both circumvented complicate problems of chloridea