盾叶薯蓣细胞及其内生真菌共培养机制的分析.pdfVIP

摘要 C．…wri I历叶薯蓣(／)io“。ⅢY啊zj删i／州’o”．qiNght)魁我因特有的、具有 ～ J]i13)是台成甾体激 草要经济意义的药用植物，其有效成分薯蓣皂甙元(dj(：)sge 素药物的重要原料。由于内生真菌可产生与宿主相同或相似的生理活性成分， 针刑目I狩薯蓣皂甙元资源紧缺的问题，本课题组将盾叶薯蓣细胞与其内生真菌 共培养7tL产’次7H弋谢产物以期提高薯蓣皂甙元的合成能力。过氧化物酶(POD)， 真菌!卜f：乏和植物防御体系及应答外界不良刺激(如抗瘸性、次生代谢物和植物 、／’ ， 脆与其内生真菌共培养过程的生理生化机制，为盾叫咎蓣细胞与其内生真葡批 培养过稃中细胞与菌体的生长及次生代谢产物的合成提供理沦依掘。实验研究 了单独培养的盾叶薯蓣细胞适合生长的培养基、激素浓度与配比、接种量、蔗 糖浓度以及在各种培养基上不同生长阶段的POD、PPO、PAL活性变化和过氧化 物酶、多酚氧化酶、酯酶同T酶谱带变化．在此幕础一V．ti)F究了屙IJ’r薯蓣细胞与 内_i真菌共培养体系的生理生化机制。研究结果表明： 1盾『】11薯蓣细胞在Ms培养纂(其中附加NAA1．6mg／l。，BA2．Omg／[．，蔗 糖?,Og／I。，琼脂79／L，pH5．7)，接种量0．8a鲜氡／瓶条件卜，卜长速率较高，细 胞懒色淡黄，愈伤组织鼢陕疏松：生长曲线挈“s”形，i]分为延迟期，指数牛 长期和减速期。 厂 t REll 细胞和E0326，细胞有褐化现象，细胞形态多为长形；细胞’j27的缀合在 E】l 培养后期R 27生长占优势，导致REI127生物量急剧上升，细胞几乎全部死 亡：细胞与RE()105共培养细胞和菌体的生物量都高于单独培养的细胞和菌体， 细胞酾色淡黄，细J胞形态多为圆形和椭网形。同时研究了缺培养过程中POD、 种酶的活性均与基培养细胞的生物量呈乖相关麓口胞生|．∈=较差的共培养体系(细 胞与E0326 培养物的过氧化物酶、多酚氯化酶、酯酶同j．酶黼潜有缺失现象：适于细胞和 滴体建同_一长的北培养体系(细胞’j 为最高，典蚺养物的过氧化物嗍、多酚氧化酶、嘴酶剐T晰黼瞒翻新带一带叫}现 目．细胞与菌的原有谱带没有缺失。发现过氧化物酶、多『【|j)氧化酶、苯丙氨酸解 氨酶、酯酶能指示细胞与内生真菌培养过程中的生理‘HJ二变化。对较好的细胞 ‘jRli01(15的)￡培养体系在Ms同体培养基】二进行第二代继代培养。盾时薯蓣细 y 的同T酶涪带较多阻活力较高。培叶‘薯蓣细胞与内生真菌RE0105共培养第二代 ／ 的性状与POD、PPO和PAl。活性和过氧化物酶、多酚氧化酶、酯酶同工酶谱带与 第代相比比较稳定。 曩Z呻≈ 培养基n勺不同培养阶段以及硝、同培莽幕的同。培养阶段，过氧化 物酶和苯内氩酸解氯酶活性与盾叶薯蓣细胞生长呈一棚关，在细胞t卜【∈较为fl}： 瞄的时期活性也较高。多酚氧化酶活性随培养时问延Kr^]Yl高。 4．在不同条件下生长的细胞过氧化物酶同工酶、多酚氧化酶同工酶、酯酶 恫f叫蝣W符数}_；1剌活性存存萋辟。细胞在适合生长的培养基一1二|潜带较多且颜色 较深。当细胞处r指数生长期，嗣工酶谱带数目保持硝i变，谱带颜色随培养时 删延长而加深。当细胞尘长速率较低或褐化较严重时有谱带|_二的缺失且谱带颜 色较淡。 5．内川i真i2．-iREO】f)5征与寄主细胞共培养的i,_11gZfl，不断的调节其次尘代_}身j 以快速的适应环境而与寄主细胞在过氧化物酶同工酶谱带的表达上产q：了趋同 博。 关键词：盾Il将蓣 内生真}抽 jI培养生理生化 ABSTRACT Dio,,corea C ofdioscoreaceae zingiherensisH．Wright