荧光假单胞菌aa5 phb解聚酶基因敲除载体构建及以rsp为基础的厌氧菌进化研究.pdf

摘要 摘要 生物大分子是指生物体内由分子量较低的基本结构单位首尾相连形成复杂 空间结构，并具有生物活性的多聚化合物。聚一B一羟丁酸(PHB)是一种自然界 典型的生物大分子，是一种具有重要经济价值、环保价值的工业原料。 从本实验室分离到一株高产PHB的荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens sp．PCI7 IIPHA type operon中的PHA 敲除用上下游同源臂，连接在经过修改的pHsh-kana上，得到可以用于敲除户 fluorescens rDNA构建系统发育树，但是其 目前研究微生物系统进化主要采用的是16S 在厌氧菌的进化研究中往往不尽如人意。还原力调控蛋白(RSP)是一种转录调 节因子，目前已在许多严格厌氧细菌和兼性厌氧菌中北发现。它作用于呼吸链， 保守性，具有作为分子钟以研究厌氧细菌进化的潜力。 rDNA和RSP 本课题中，选取了51株严格厌氧细菌，分别取得他们的16S 蛋白序列，同时采用最大似然法(ML)和贝叶斯法(BI)构建系统发生树。分别对比 后发现，同一序列下，BI方法略好于ML方法。同一方法下，RSP序列构建的 系统发生树较16SrDNA构建的系统发生树能够更好的反映厌氧菌间的进化关 系。初步可以认为RSP可以作为分子钟来研究厌氧菌的系统进化。 关键词：荧光假单胞菌；PHB解聚酶；RSP；厌氧细菌； 进化 Abstract Abstract Biomacromoleculesarethebioactive aredefinedasthe polymers，which large substancesmadeofbasic complex up the industrialraw have oneof biomacromolecule．As typical materials，PHBimpor- tanteconomicvalueandenvironmentalvalue． PHB wasclonedformPseudomonasfluorescens gene depolymerasephaZ A2a5whichIsolatedfromAmericanAlaska．TtheandPseudomonas17 genes sp．PC IIPHA inthePHA t)rpe operon depolymerasegenehomology96％．According to anddownstreamarmwas toconnect whichhas phaZ,stream designed pHsh-kana been toform beuse changed in toknockoutPseudomonasfluorescensA2a5for