褶纹冠蚌cdn文库构建与timp基因的表达.pdf

Jm 41411 Y21 摘要 摘要 体侵染而经常发病，给其育珠能力产生了较大的影响。因此对其进行分子免疫 方面的研究是有必要和实际意义的。 cDNA，用Sfi 1ISK载体相连接， I酶切，将处理过的PCR产物和pBluescript 106cfu／mL，重 构建褶纹冠蚌血细胞全长cDNA文库。经检测，其滴度为1．07x 组率为96％，平均插入片段为732bp。说明所构建的褶纹冠蚌血细胞文库属质 知功能的ESTs为123个，按生物学功能把它们可以分成了七类。 基因，经测定发现它在闭壳肌中表达最大，而在血细胞、外套膜、肝胰腺和性 腺中表达量则低得多。注射嗜水气单胞菌6，12，24，48h后，经荧光定量分析 测定，其在血细胞，肝胰腺，鳃表达水平均有一定量的升高。 设计含酶切位点的表达引物，从褶纹冠蚌的血液中提取总RNA，利用 表明重组的TIMP在大肠杆菌(Escherichiacoli)37C下诱导均以包涵体形式存 在，大小为32KDa左右；其N端表达产物为20KDa左右。优化表达条件后， 加lmM 以纯化出来。即可通过基因克隆和原核表达的方式可以获得具有生物活性的 TIMP融合蛋白。 原核表达 II Abstract Abstract Pearlmusselin China．ItISofen CristariaisoneoftheFreshwater plicata infected makea influencetothe ofthePearl． bypathogen，whichgreat ability the immune． is and to on molecular Therefore，itnecessarymeaningfulstudy totalRNAwithTriz01 blood wewereextracted meth。d，』ts 1 cris尬r池pffcata cells cDNA wereconstructed toSMARTcDNA full．1engtlllibrary according PCR Kit was with restriction) methods，and synthesisdescription ligated product(sfi ofcDNA was andthe IISK