鸡avbd2成肽优化基因的大肠杆菌表达及抑菌活性研究.pdfVIP

摘要 鸡B．防御素是一种富含半胱氨酸的小分子多肽，因其具有抗菌谱广、抗菌机制特 源抗菌肽中的一种，主要分布于骨髓和肺中，对病原微生物具有较强的杀伤作用。 诱导温度和诱导物浓度两方面对诱导条件进行优化，并初步研究了纯化后蛋白的抑菌 活性。 具体内容和结果如下： 1鸡B．防御素一2成熟肽基因的设计与合成 分别添加B以mHI和DRI酶切位点，并构建克隆载体pMDl 酶切位点，并构建克隆载体pMDl8．Tsimple—AvBD2。 2鸡B．防御素．2融合蛋白的表达与纯化 构建的表达载体中成熟肽片段的同源性为100％。挑取阳性克隆培养至对数期，加 kD。表 IPTG进行诱导表达，经SDS—PAGE电泳发现表达的融合蛋白分子量约为30 mm01／L h后可溶性融合蛋白得到最佳表达。用 达重组子在20℃经0．5 IPTG诱导5 GST纯化树脂纯化可溶性融合蛋白后得到单一条带，BCA法测定纯化后的蛋白浓度， 结果显示密码子优化株的蛋白表达量有较大程度的提高。 3鸡B一防御素．2融合蛋白抑菌活性的研究 的最小抑菌浓度范围为31．25～125pg／mL。透射电镜观察发现，融合蛋白作用后可引 起病原菌菌体变形，菌体细胞破裂，细胞内容物大量外泄，菌体成为不规则残片。 以上研究表明，本研究成功的运用人工合成技术构建AVBD2成熟肽密码子优化 基因的原核表达载体；IPTG诱导并纯化出目的融合蛋白，初步摸索可溶性融合蛋白 mmol／L 诱导的最佳条件为20℃，0．5 IPTG；抑菌活性研究表明纯化蛋白对多种菌具 有抑菌作用，对细菌的形态结构有明显的损伤作用。本研究为鸡B一防御素一2基因工 程新制剂的生产和应用奠定了基础。 关键词：鸡B．防御素．2， 密码子优化，大肠杆菌，融合表达，抑菌活性 AbStract a become small has isakindof peptide，which Chick锄．B．defensin cysteine—rich to a resiStancebact耐a，speclal toabroad of researchhot“e Spectr眦 nnure inthe o士the role prospect andso a铲eater residue on，wiUplay mechanism，no avian an ofa11imal beta-defensin。2(A饵D2)is applicationshusbaIldry．Chicken