15-AtCS82基因T—DNA插入突变体筛选与过表达转基因植株的获得.pdfVIP

第39卷第3期 湖南农业大学学报(自然科学版) Vb1．39NO．3 2013年 6月 JournalofHunanAgriculturalUniversity(NaturalSciences) Jun．2013 D0I：10．3724／SRJ．1238．2013．00253 AtCS82基因T—DNA插入突变体筛选和 过表达转基因植株的获得 陈锦华 ，郭磊 ，易力雄 ，刘春林 ，阮颖 (湖南农业大学 a．生物科学技术学院；b．农学院，湖南 长沙 410128) 摘 要：AtCS82是拟南芥中一个功能未知的基因，推测该基因可能与种子油脂合成代谢相关。为探明AtCS82基 因的功能，采用半定量 RT-PCR法对AtCS82基因在拟南芥不同组织(茎、叶、花、果荚)中的表达情况进行了分析， 发现其在果荚中的表达量较高，而在茎、叶、花中的表达量明显偏低 ，推测 AtCS82基因可能参与种子发育；使 用三引物法对T-DNA捅入突变体进行纯合子筛选 ，并通过RT-PCR检测纯合子植株中AtCS82基因的表达情况， 试验结果证明获得了稳定遗传的AtCS82基因沉默纯合突变体；通过构建pCAMBIA1300-35S：：CS82过表达载体， 并转化拟南芥哥伦比亚野生型(Co1)的方式，获得了AtCS82基因的过表达转基因植株。 关 键 词：拟南芥；AtCS82基因；纯合子筛选；过表达；转基因植株 中图分类号：Q786 文献标志码：A 文章编号：1007—1032(2013)03—0253~06 ScreeningofT-DNA insertionmutantsandconstruction ofplantswithAtCS82overexpressed CHEN Jin—hua，GUOLei，YILi—xiong，LIU Chun—lin，RUANring (a．CollegeofBioscienceandBiotechnology；b．CollegeofAgronomy，HunanAgriculutralUniversity，Changsha410128 China) Abstract：ThefunctionofAtCS82geneinArabidopsisisstillunknown，butitissupposedtobeassociatedwithseedoil anabolism．ToinvestigatetheufnctionofAtCS82gene，semi—quantitativeRT-PCRwasusedtoanalyzetheexpressionof AtCS82geneindifferenttissuesofArabidopsis(stem，leaf,flower,pod)，theresultsshowexpressionofAtCS82genewas highinpod，butlow instem，leafandflower,indicatingtheparticipationofAtCS82geneinseeddevelopment．Three primerswereused to screen homozygousmutantswith T-DNA insertion，and the expression ofAtCS82 gene in homozygousmutantplantwastestedusingRT-PCR，theresultsprovedhteobtainingofstablepuremutantwithAtCS82 gene silenced．AtCS82一overexpressing transgenic plantswere obtained by constructing pCAMBIA1300-35S：：CS82 recombinantplasmid，followedbytrans