HSP70%2fCD80嵌合DNA疫苗通过调节趋化因子及受体对哮喘小鼠气道炎症干预作用及机制的研究.pdfVIP

不能完全治疗哮喘。现如今的研究中对免疫疫苗的治疗方法已经有了 初步的研究，并取得了一定的成果。哮喘的本质主要是免疫反应失去 了平衡，从而亢进的一方分泌多种细胞因子使炎症介质和炎症细胞从 外周血液迁移到发生炎症的部位，沉积在气道胶原纤维中发生一系列 免疫反应。其中包括相应的趋化因子及趋化因子受体结合产生离子通 道开放，离子外流引起细胞内外环境失调，导致气道分泌大量粘液， 阻塞气道，患者出现呼吸困难，流鼻涕，心累等症状。所以应用免疫 治疗的方法抑制亢进的一方反应，加强被抑制的一方，从而使得恢复 免疫平衡状态，打断上诉一系列反应链，重新使身体机能复原。那么 怎么样来使用免疫方法呢?免疫疫苗有很多的优点，它进入体内后可 以通过抗原提成的作用使得TH1反应加强从而使得另一方收到抑制。 没有副作用，因为其本质是增强自身的免疫力，使得免疫内环境达到 平衡。现在研究的核酸DNA疫苗就是其中的一种。也是最热门的一 类。本实验也是应用处理过的核酸DNA疫苗给小鼠注射，然后测量 小鼠的各类指标如:IgE，TACR ，IL-4 ，CCR4等相关的细胞因子及趋 化因子，发现这些导致气道炎症反应和气道高反应性的炎症介质和因 子都明显地下降，疫苗组小鼠出现的相应的哮喘症状也减轻，甚至是 消失。这个实验证实了核酸疫苗的治疗方法是确实有效的。为临床研 究奠定了基础。 方法：鉴定HSP70/CD80嵌合DNA真核表达质粒，制备pVAX1质粒和 HSP70/CD80嵌合质粒.对照组、哮喘组、pVAX1载体组和HSP70/CD80 嵌合DNA疫苗组。载体组和疫苗组分别腹腔注射pVAX1质粒和 HSP70/CD80嵌合质粒，对照组与哮喘组注射相同剂量的生理盐水。 眼球采血用ELISA方法检测外周血中IgE 的含量。光镜下观察小鼠肺 组织病理变化。免疫组织化学TARC抗原，定位其来源和在气道中的 表达情况。Real-Time PCR检测肺组织IL-4和CCR4基因的表达水平。 结果：1．小鼠气道反应性：予以不同浓度AchE刺激后，与对照组相 比，哮喘组和载体组小鼠的气道反应性明显增高，而疫苗组有所降低。 在AchE浓度达24mg/ml后，哮喘组、载体组小鼠显著高于对照组 (P0.050) ，而疫苗组小鼠低于哮喘组开始有明显差异，差异有统计 学意义(P0.050) 。 2 ．肺组织病理学改变：在小鼠肺 HE 染色的病理切片中，哮喘组和 载体组其支气管和血管周围甚至肺泡有明显的炎细胞浸润，支气管上 皮有断裂、坏死，差异有统计学意义(P0.050) ；而疫苗组能有效抑 制气道和血管周围的炎症反应,差异有统计学意义(P0.050) ；在小鼠 肺切片PAS 染色中，哮喘组和载体组气道上皮中杯状细胞增生肥大， PAS 着色细胞明显增加，管腔中有大量黏液形成， 3 ．血清中IgE 浓度变化：与对照组比较，哮喘组和载体组小鼠血清 中IgE 含量明显升高(P0.050) ；与哮喘组相比，疫苗组血清中 IgE 含量降低，差异具有统计学意义(P0.050) 。 4 ．免疫组化检测肺组织TARC 蛋白表达情况：免疫组化显示TARC 蛋白主要表达于支气管上皮细胞，哮喘组和载体组 TARC 表达明显 增多呈阳性或强阳性(P0.050) ，与哮喘组比较，疫苗组 TARC 表达 呈阴性或弱阳性，差异学有统计意义(P0.050) 。 5 ．Real-Time PCR 法检测肺组织IL-4 、CCR4 的基因表达水平：与对 照组比较，哮喘组和载体组IL-4 、CCR4 的基因表达增加(P0.050) ； 与哮喘组相比， 6 ．相关性分析：小鼠免疫组化半定量TARC 与肺组织炎细胞呈正相 关(r=0.661 ，P ＜0.010) ；小鼠免疫组化半定量 TARC 与肺组织 IL-4 呈正相关(r= 0.573 ，P ＜0.050) ；小鼠免疫组化半定量 TARC 与肺组 织CCR4 呈正相关：(r=0.706 ，P ＜0.050) ；小鼠肺组织IL-4 与CCR4 相呈正相关：(r=0.536 ，P ＜0.050 ）。 结论：1,为该质粒在动物体内的免疫学效应进一步研究奠定了基 础。2 ．HSP70/CD80嵌合DNA疫苗可减轻气道炎症反应，减少黏液 分泌，降低气道阻力。3 ．本研究结果显示HSP70/CD80嵌合DNA疫 苗可通过抑制TARC在上皮细胞的表达，从而打断了IL-4 ，TARC正 反馈效应，减弱Th2反应，为该疫苗作为新型免疫调节性疫苗提供新 的理论依据。 关键词：哮喘；