SSR标记变性聚丙烯酰胺凝胶快速银染方法的建立.pdfVIP

·l36 中国马铃薯，第29卷，第aM，2015 中图分类号：$532 文献标识码：B 文章编号：1672--3635(2015)03—0136—05 SSR标记变性聚丙烯酰胺凝胶快速银染方法的建立 李建武 ，李 宁 (1．甘肃省农业科学院马铃薯研究所 ，甘肃 兰州 730070；2．甘肃农业大学生命科学技术学院。甘肃 兰州 730070) 摘 要：针对传统聚丙烯酰胺凝胶电泳银染方法存在染色时间长、步骤繁琐，难以大批量试验等诸多不利因 素，对改良的银染检测方法与文献报道的4种银染检测方法的染色效果、时间及试剂成本等进行对比分析。结果表 明，改良方法省略前期的漂洗与固定步骤，只进行银染、漂洗、显影和终止4个步骤，整个银染过程耗时12min， 较其他方法耗时少，目标片段较清晰，试剂用量少，过程较为简单，可批量操作。 关键词：SSR标记；变性聚丙烯酰胺凝胶 ；银染 EstablishmentofRapidSilver-stainedMethodofDenaturingPolyacrylamide GeIOfMicrosatelliteMarkers LIJianwu ，LINing (1．InstituteofPotato，GansuAcademyofAgriculturalSciences，Lanzhou，Gansu730070，China； 2．CollegeofLifeScienceandTechnology，GansuAgriculturalUniversity,Lanzhou，Gansu730070，China) Abstract：Traditionalsilverstaining method ofdenaturingpolyacrylamidegelelectrophoresisistime—consuming， tedious，anddifficultforlarge·scaleoperation．Animprovedsilverstainingmethodandfourotherreposedmethodswere comparedintermsofstainingquality,timeconsumption，andreagentcost．Fortheimprovedsilverstainingmethods，rinsing andfixingwereomi~edattheearlystage，andonlysilverstaining，rinsing，developingandendingwereneeded，takingonly12 mintotallyintheprocess．Thisimprovedmethodwastimeefficient，andshowedcleartargetfragments，whichusedless amountofreagentsandwaseasytooperatewhencomparedwithotherreposedmethods． KeyWords：SSR；polyac~lamidegel；silverstaining 聚丙 烯 酰胺凝 胶 电泳 (Polyacrylamidegel (Amplified fragmentlength polymorphism)、 SSR electrophoresis，PAGE)由Raymond和Weintraub建 (Simplesequencerepeats)等分子标记的检测 。 立 ，是分析蛋 白质和核酸的一种常用的电泳方 目前常规的聚丙烯酰胺凝胶 的银染过程耗时 法。由于其具有上样量少、不易扩散、分辨率高 长 ，步骤繁琐 ，大批量的试验不仅费时、费力， 且易于观察的特点，在分子生物学及相关学科的 且存在染色时间较长或分辨率较低等方面的缺 基础和临床研究中得以广泛的应用。目前该方法