靶向 survivin 基因的 shRNA 慢病毒载体的构建及其对膀胱癌 EJ 细胞凋亡的影响.pdfVIP

第36卷 第 3期 暨南大学学报(自然科学与医学版) V0l_36 No．3 2015年 6月 JournalofJinanUniversity(NaturalScience＆MedicineEdition) Jun． 2015 靶 向survivin基 因的 shRNA慢病毒载体 的构建及其 对膀胱癌 EJ细胞凋亡的影响 陶 燕， 付生军， 洪 梅， 王志平， 马宝良， 卢建中 (兰州大学第二医院 泌尿外科研究所，甘肃省泌尿系统疾病研究重点实验室，甘肃省泌尿系临床医学中心，甘肃 兰州730030) [摘 要] 目的：构建 survivin基因特异性 shRNA慢病毒干扰载体，转染膀胱癌EJ细胞 ，研究survivin基因在膀胱 癌细胞株中的表达抑制情况，观察 survivinshRNA慢病毒载体对EJ细胞凋亡的影响．方法：以survivin基因为靶标设 计 shRNA干扰序列，克隆至pSIH1一H1一copGFP慢病毒载体．干扰载体鉴定正确后转染膀胱癌细胞株 EJ细胞 ，荧光 显微镜下观察GFP表达情况 ，实时荧光定量 PCR检测survivin基因mRNA含量变化，Westernblotting法检测 sur- vivin蛋 白表达 ，AnnexinV—FITC／PI双染法检测 EJ细胞凋亡情况．结果：PCR扩增鉴定 、DNA测序证实 survivin慢病 毒干扰载体构建成功 ；EJ细胞经干扰载体处理后，EJ细胞survivin基因mRNA水平下调了73．33％，蛋白表达受到 显著抑制，EJ细胞凋亡率达到24．39％．结论：成功构建了靶向survivin基因的shRNA重组慢病毒干扰载体，可以显 著降低转染细胞survivin基因的表达水平，并有效提高膀胱癌细胞凋亡率． [关键词] 载体构建； survivin；短发卡状RNA(shRNA)；膀胱癌； 细胞凋亡 [中图分类号] R737．14 [文献标志码] A [文章编号] 1000—9965(2015)03—0239—07 doi：10．11778／i．idxb．2015．03．009 Constructionandidentificationofsurvivin shRNA lentivirusvectorand itseffectsonapoptosisofbladdercancerEJcells TAOYan， FUShen~un， HONGMei， WANGZhiping， MABaoliang， LUJianzhong (InstituteofUrology，theSecondHospitalofLanzhouUniversity，KeyLaboratoryofUrologicalDiseasesinGansuProvince， GansuNephro—UrologicalClinicalCenter，Lanzhou730030，China) lAbstractj Aim：ToconstructaneffectivesurvivingeneshRNA lentiviralvector，andevaluateits effectsonapoptosisofbladdercancercelllineEJ．Methods：TheshRNAtemplateofsurvivinwascloned intopSIH1一H1一copGFP shRNA vectors．Therecombinantplasmidwasidentificatedbyagarosegelelec- trophoresisandsequencinganalysis；thenitwastransfectedintotheEJcells．ThemRNAandproteinlev- elsweremeasuredusingreal—timequantitativePCR andWestern blottingassayrespectively，andtheap— optosisofEJcellswasmeasuredby