半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）雌性特异基因CSW3重组蛋白的表达与应用.pdfVIP

第 36卷 第 3期 渔 业 科 学 进 展 Vol_36．NO．3 2015 年 6 月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Jun．，2015 DOI：10．11758／yykxjz http：／w／ww．yykxjz．cn／ 半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)雌性特异基因 CSW3重组蛋白的表达与应用木 王天姿 ，2 王 娜2 胡乔木2 邵长伟2 陈松林2① (1．中国海洋大学海洋生命学院 青岛 266003； 2．农业部海洋渔业可持续发展重点实验室 中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛 266071) 摘要 CSW3基因序列来源于半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)全基因组测序项 目，是经过筛选得 到的雌性特异候选基因之一。本研究探索了半滑舌鳎雌性相关基因CSW3的表达与应用，构建了半 滑舌鳎雌性特异CSW3基因重组表达载体，通过大肠杆菌进行了体外重组表达，对基因表达产物进 行分离纯化，并通过蛋 白转染的方法研究了纯化的蛋 白对几个性别相关基因的影响。结果显示，雌 性特异CSW3重组蛋 白注射鱼体后对半滑舌鳎性腺foxl2、sox9a、amh这 3种性别相关基因的表达 水平具有显著影响，能够引起雌性相关基因Jbxl2表达上调、雄性相关基因sox9a和amh表达下降。 从蛋白水平对雌性相关基因CSW3的基因功能进行初步研究，为半滑舌鳎性别控制及全雌苗育种提 供基因资源及技术方法。 - 关键词 半滑舌鳎；重组蛋 白；CSW3；蛋 白转染：性别相关基因 中图分类号 $965 文献标识码 A 文章编号 2095．9869(2015)03．0030．06 半滑舌鳎 (Cynoglossussemilaevis)是我国特有的 1999；Tannour-Louetetal，2010；Matsudaetal，2002； 名贵经济海水养殖鱼类，主要分布于黄渤海区，属于 邓思平等，2008a；Chenetal，2014)、芳香化酶基 因 近海温水性底层鱼类。由于其 肉质鲜美、营养丰富， (xg思平等，2008b)、amh、sox9(Fukadaetal，1995；Ito 深受消费者喜爱。半滑舌鳎雌、雄个体在生长速率上 etal，1995；常重杰等，2000；Nakamotoetal，2005；Dong 存在巨大差异 ，雌性 比雄性生长快 2—3倍。由于雄性 etal，2011)、GSDF等基因。另外，dmrt4、foxl2(Dong 个体生长缓慢 、个体小 ，致使半滑舌鳎的养殖成本升 e al，2011；Tannour—Louetetal,2010；Uhlenhautetal， 2009)、soxl0、daxl、dmrt3、wtl、sfl和 tra2基因也 高，降低了养殖产量和效益，严重影响了半滑舌鳎苗 有报道。在半滑舌鳎中已克隆出dmrtl、cypl9a(Deng 种的推广，阻碍了半滑舌鳎养殖产业的发展。半滑舌 etal，2008)、foxl2、sox9a、figla等性别相关基因(孙 鳎性别决定类型为 ZW 型，雌性具有特异的w染色 建等，2014)，并从蛋白水平上对雄性特异基因dmrtl 体。半滑舌鳎全基因组测序工作的完成为半滑舌鳎雌 进行基因功能研究(胡乔木等，2013)。半滑舌鳎雌性 雄特异基因的筛选鉴定提供有力支撑，而性别相关基