白桦BpGT14基因表达载体及RNA干扰载体的构建.pdfVIP

第35卷 第 7期 中 南 林 业 科 技 大 学 学 报 Vb1．35 No．7 2015年7月 JournalofCentralSouthUniversityofForestry Technology July．2015 Doi：10．14067~．cnki．1673-923x．2015．07．004 http：／／qks．csuft．edu．ca 白桦 印G714基因表达载体及 RNA干扰载体的 构建 李营营 ，孙丰坤 ，李晓一 ，詹亚光 ，曾凡锁 (东北林业大学 a．生命科学学院；b．林木遗传育种与生物技术国家重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150040) 摘 要：糖基转移酶基因是生物分子糖基化中的关键基因，已有研究表明少数糖基转移酶 14 (Glycosyltransferase 14，Gn4)家族基因在植物细胞壁合成及对逆境的响应中发挥重要的生物学功能，然而 GT14基因对逆境的响 应机制 目前仍不清楚。为了研究糖基转移酶基因的生物学功能，本实验室在克隆了白桦BpGT14基因 (JQ409354) 编码 区序列全长的基础上，利用BamH I单酶切的方法构建了白桦BpGT14基因的pBI121植物表达载体，并 利用一步PCR之后在同一体系中同时酶切 ．连接的方法，构建 了BpGT14基因RNA干扰载体，相 比于传统的 RNA干扰载体构建方法更为高效快捷。测序结果表明，植物表达载体及RNA干扰载体均构建成功。本研究的完成， 为BpGT14基因进一步的遗传转化及转基因植株的获得奠定了基础，同时为今后植物表达载体的构建提供了高 效便捷的参考方法。 关键词：白桦；糖基转移酶；BpGT14基因；细胞壁；载体构建 中图分类号：$792．153 文献标志码：A 文章编号：1673—923X(2015)07-0017-05 ConstructionofBpGT14geneexpressionvectorandRNA interference vectorinBetulaplatyphylla LILei—lei，SUN Feng．kun，LIXiao．yi，ZHANYa-guang，，ZENGFan．SUO， (a．CollegeofLifeSciences；b．KeyLaboratoryofForestTreeGeneticImprovementandBiotechnologyofNation，NortheastForestry University,Ha~in150040，Heilongjinag，China) Abstract：Glycosyltransferasegeneisthekeygeneinthebiomoleculesglycosylation．Somestudieshaveshownthataminoriyt glycosyltransferase14(GT14)genefamilyplayanimportantbiologicalfunctioninthesynthesisofplantcellwallandresponse toadversity，butthestressresponsemechanism ofGT14 generemainsunclear．In orderto studythebiologicalfunctionof glycosyltrnasferasegene，basedonfull—lengthofclonedBpGT14gene(JQ409354)byourlaboratory,wehaveconstructedtheplnat expressionvectorpBll21throughsingledigestionandconnectionandRNA interferencevectorthr