《木薯淀粉合成关键酶AGPase小亚基基因全长克隆》.pdfVIP

南方农业学报 JournalofSouthernAgriculture 2014．45(7)：1147—1153 ISSN 2095—1191；CODEN NNXAAB http：Ilwww． nfnyxbcn DOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2014．7．1147 木薯淀粉合成关键酶AGPased~亚基基因全长克隆 郭雅静 一，罗兴录 ，陈会鲜 (广西大学 农学院，南宁 530005； 广西作物遗传改 良生物技术重点开放实验室，南宁 530007 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，南宁 530005) 摘要：【目的】克隆木薯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)小亚基基因cDNA全长序列 ，为木薯高淀粉品种 的分子育种提供依据。 【方法 】根据木薯AGPase小亚基基因已知片段设计特异性引物，以木薯根 、茎、叶为材料 ，利用 PCR及RACE克隆木薯AGPase／]~亚基基因cDNA伞长序列。运用生物信息学方法对其核苷酸序列和推导氨基酸的理 化性质 、蛋白质 级结构进行系统分析。【结果】克降获得木薯淀粉合成关键酶AGPase／b亚基cDNA全长1566bp，其中 包括1566bp的完整ORF，编码一个含521个氨基酸的多肽。其理论蛋白质分子量57．01kDa，等电点6．1，呈酸性。多重序 列比较分析结果显示 ，木薯淀粉合成关键酶AGPase／]~亚基核苷酸序列与蓖麻、麻风树和杨树相应序列的相似性分别 为87％、87％和86％。结合系统进化树分析结果推测，木薯淀粉合成关键酶AGPase小亚基在不同物种及进化过程中具 有高度的保守性。蛋白三级结构分析结果表明，木薯AGPase／]~亚基蛋白具有15个仅一螺旋、24个B一折叠和多个转角。【结 论】木薯AGPase小亚基基因cDNA全长序列与蓖麻 、麻风树和杨树等具有较高的同源性。 关键词：木薯；腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)；基因克隆；序列分析；基因全长 中图分类号：$533 文献标志码：A 文章编号：2095—1191(2014)07—1147—07 Clloonniinnggaanndex：orreesssslioonnaannaallyyssiissooflssmmaal1l1ssuubuunniittgeenneetfUu儿ll—一 length incassavaAGPase GUOYa-jing，2LUOXing-lu，．CHENHui—xian (AgriculturalCollege，GuangxiUniversity，Nanning530005，China；GuangxiCropsGenetichnprovementand BiotechnologyLab，Nanning 530007，China；。StateKeyLab0ratoryfnrConservationandUtilizationofSubtropicalAgr0一 bioresources，Nanning530005，China) Abstract：【Objective】ThesmallsubunitgenecDNAsequenceofcassavaAGPasewasclonedinordertoprovide referencesforgenetictransofrmationofcassavastarchandmolecularbreedingofhigh—starchvarieties．【Method】According toknown smallsubunitgenesegmentsofcassavaAGPase，thespecific primerswasdesigned．B