有机相酶促反应中固定化脂肪酶的非共价修饰.pdfVIP

维普资讯 ① 【一 第 17卷 无 锡 轻 工 大 学 学 报 Vo1．17 第 4期 joURNALOFWUXIUNIVERSITYOFLIGHT1NDUsTRY 1998No．4 有机相酶促反应中 固定化脂肪酶的非共价修饰 1 徐 岩 章克 昌 ，_ — 、 — — — 一 ， — 、 — 一 (无锡轻工大学生物工程学院，无锡 ~14036) D 、々．5 摘要 在选用 8种具有两亲性质的表面活性剂、2种胆汁盐和 12种金属盐，对庚 烷 中催化 己酸乙酯合成的固定化米氏毛霉脂肪酶进行非共价修饰时发现 ：在一定 的质量浓度范 围内，阴、阳离子型和非离子型的表面活性剂对脂肪酶酶促催化活 性有不同程度的促进；在废物浓度从 0．25mol／L提高至 0．5mol／L时 ，气溶胶硫 代琥珀酸 zEz一乙己酸]酯钠盐、十二烷基磺酸钠和 TritonX一100对于脂肪酶保持稳 定的催化活性有较太的提高作用。并从酶的活I生·中心和表面活性剂的结构和特性 上对原因进行j分析。而胆汁盐和金属盐对脂肪酶的修饰作用不太，在高浓度时反 关键词 固定 肪酶}l的修饰；表面活性荆；抑制荆 分类号 石 —’--‘1=．Z— 一 f醮 zJ醮 0 前 言 异常环境有机介质中酶促催化具有增强非极性底物的溶解性，溶剂化作用改变反应系 统的动力学和平衡而改变反应性质，能控制和改变底物部位的选择性及手性选择性、抑制水 引起的副反应、酶不溶解和易回收等特点。因而 已被用来台成众多的有用的有机化台物，成 为酶工程、生物工程中新的研究热点，有些产品已工业化生产 J。 但是在有机介质中酶容易受到各种因素的影响，酶与底物的接触受到限制而使酶促反 应效率降低，反应时间较长，因此酶的选择性和稳定的催化活性的调节与控制是研究有机 相酶促反应机制和应用的重要课题。目前酶在有机介质中催化的选择性和稳定性的调节与 控制方法有：1)选择和优化反应条件，但此法有局限性，改变的幅度也有限；2)改变酶分子 自身，如蛋白质工程、酶的化学修饰等 。与前两法相比，非共价修饰具有方便、实用的特 点。这些非共价修饰剂大多是酶的抑制剂。脂肪酶抑制剂可以用来研究脂肪酶的结构和代 谢特性，如在对米氏毛霉 (Mucormiehei)脂肪酶晶体结构及其选择性和作用方式的研究中 已有效地使用它的抑制剂[]‘。在有机相酶学研究中，Russel，Guo，Goto等通过改变脂肪酶 江苏省科委应用基金项 目 收稿 日期t1998-03—18 第一作者；镣 岩，男．1962年8月生．工学博士．副教授 维普资讯 无 锡 轻 工 大 学 学 报 第 l7卷 的构象或界面特性来调节和控制酶的稳定的特异性 j。此前作者已经报道了使用微生物 脂肪酶在正庚烷中合成短链芳香酯 。本研究是在前面工作的基础上，使用具有两亲特性 的表面活性剂、胆汁盐和金屑离子这些脂肪酶的抑制剂对固定化脂肪酶进行非共价修饰， 以利于酶活性的调节和控制。 1 材料和方法 1．1 实验器材 1)固定化 Mucormiehei脂肪酶 (商品名 LypozymeIM) NovoNordisk公司提供。 2)乙醇、己酸、庚烷和金属盐等化学试剂 均是从上海化学试剂站购买的分析纯试剂。 3)表面活性剂：十二烷基苯磺酸钠 (LAS)，十二烷基磺酸钠 (S