绿色产色链霉菌E-219形态发育分化及研究.pdfVIP

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  • 2015-11-22 发布于安徽
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绿色产色链霉菌E-219形态发育分化及研究.pdf

塑垩三塑奎兰堡主塑堡茎 _———·—_-———__—·-—’—————_——_—_--·_··_—--_——_-——————-——_—————————__—__————____-_-__·■I.=…¨…l●川¨川l川-Jl¨-…lJ¨I /㈣Y2㈣0 7㈣042脚3 绿色产色链霉菌E.219形态发育分化的研究 摘要 链霉菌具有复杂的形态分化周期,在复杂的形态发育分化中能产 生极为丰富的次级代谢产物,而且两者的关系密不可分。绿色产色链 霉菌经发酵可产生正糖霉素族的寡糖类抗生素一阿维拉霉素。目前国 内外对于绿色产色链霉菌的研究主要集中于高产菌株的选育、阿维拉 霉素的生物合成基因簇以及生物合成途径。有关绿色产色链霉菌形态 发育分化、形态分化过程中细胞的凋亡以及形态分化与抗生素产生之 间的关系的研究较少。 本文以绿色产色链霉菌原始菌株1315为对照,对高产菌株 15经60Co吖诱变及原生质体融合等手段改造后所 E.219(原始菌株13 得,阿维拉发酵效价高达1200 me,m)在固体、液体培养条件下菌体 发育分化的周期进行了研究,并对形态发育分化过程中细胞凋亡以及 形态发育分化与抗生素产生之间的关系进行了初步研究分析。 通过环境扫描电镜以及荧光显微镜的观察发现,原始菌株1315 经过60Co-T诱变处理、再经基因组重排育种所得高产菌株E.219,其 在固体培养基上菌落、菌丝和孢子形态均发生了较大变化。菌落由致 密的丝绒状变为中心有脐装凸起,颜色由灰绿色变为白色;孢子丝由 螺旋状变为直线型;分生孢子由椭圆形,表面有刺突变为圆柱形,表 面光滑无刺突。 ‘ √1 通过分子荧光探针、荧光显微镜对绿色产色链霉菌E.219在固体 基质上纵截面和横截面发育分化周期进行了研究。高产菌株E.219纵 截面周期包含六个阶段:孢子萌发形成杂色初生菌丝;初生杂色菌丝 发育形成单个菌落;菌落中初生杂色菌丝中具有活性的菌丝片段的快 速生长发育;菌落中菌丝片段的二次凋亡;凋亡区域中活菌丝片段二 级生长;孢子的形成。横截面发育周期包含六个阶段:孢子萌发并形 成杂色初生菌丝;杂色菌丝在固体基质上形成菌丝层;菌丝层内的杂 色菌丝中的活菌丝片段生长发育;菌丝层内菌丝的第二次细胞凋亡; 活菌丝片段的二次生长;孢子的形成。首次在绿色产色链霉菌的形态 研究中发现了初生菌丝中存在片段化的细胞凋亡现象。与原始菌株 13 15的发育分化周期相比,高产菌株E.219的形态发育分化周期多 了初生杂色菌丝的生长发育以及初生杂色菌丝中具有活性的菌丝片 段的生长发育阶段。 绿色产色链霉菌E一219在液体深层培养条件下形态发育分化大 致包括三个阶段:MI,孢子萌发且带有横隔得初生菌丝的快速生长 阶段;Growtharrest,菌丝团生长停滞阶段;MII,次生带有零星横隔 的合胞体菌丝的生长发育阶段。与原始菌株1315相比,高产菌株 E.219具有明显的短暂的菌体生长停滞期,形成的菌丝团较小。 绿色产色链霉菌E.219液体深层培养条件下菌体形态分化与菌 体的生长代谢的研究发现,菌体形态发育分化与菌体生长一定的关联 性。菌体生长曲线大致可以分为三个阶段:两个快速生长阶段和一个 生长停滞阶段。两个快速生长阶段对应与菌体发育分化中带有横隔的 n 浙江工商大学硕士学位论文 初生菌丝和次生合胞体茵丝的生长发育,而菌体停滞阶段对应的是茵 体发育分化时细胞发生大量凋亡的阶段。与此同时,菌体形态发育与 抗生素的产生也密切相关。阿维拉霉素的产生开始于茵体生长停滞 期,在MII阶段积累。阿维拉霉素主要是由次生菌丝产生。 对绿色产色链霉菌E.219在固体和液体培养条件下菌体形态发 育分化过程中细胞凋亡的初步研究发现,绿色产色链霉菌中存在细胞 凋亡现象,并且细胞凋亡发生

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