马尾松优良家系遗传多样性ISSREST-SSR及研究.pdf

摘 要 massoniana 马尾松(Pinus Lamb．)是我国南方主要的乡土造林树种和工业原料 树种，具有分布广泛，适应性强，产品用途广等特点。所以马尾松良种选育就显得 尤为重要，而在进行马尾松优良性状筛选的过程中保持其家系的遗传多样性则是保 持种子园持续有效发展的必要条件。本实验通过对25个优良家系的72个单株进行 ISSR和EST分子标记研究，主要结果如下： 1．本文研究了马尾松EST-PCR体系：本研究以马尾松DNA为实验材料，通过 对EST-SSR PCR反应体系中的模板DNA、TaqDNA聚合酶浓度、dNTPs、M92+、 引物和引物退火温度进行了分析，获得稳定可靠的马尾松EST-SSRPCR的最优体 10 5 系为：20止体系中含有2pLBuffer(Mg+Free)，30ng模板DNA，o．187 mmol／LdNTPs，‘3．75mmol／L U DNA聚合酶，退火温 M92+，8pmol引物，1．0Taq 度为56℃。 反应程序为：94℃预变性5 55℃-62℃内8个梯度进行扩增。 2．从100条ISSR引物中筛选出9条稳定，多态性好的引物，对25个马尾松优 良家系及个体进行了PCR扩增，用POPGENE32对扩增结果遗传多样性分析结果表 明，马尾松优良家系的观察等位基因数目为1．9820个，有效等位基因数目为1．4714， 0．87301，说明种群间基因流动，不足以防止遗传漂变引起种群间的遗传分化。均 显示该马尾松种子园优良家系虽然经过多次选择还保留有极高的遗传多样性和复 杂性。聚类分析表明，同一家系的个体大部分聚在一起，在基因水平上显示出较近 的遗传关系，但其中也有个体有变异存在。总体结果来看，实验中所选马尾松优良 家系间遗传多态性比较丰富，研究结果也表明，虽然经过优良性状的多次选择，马 尾松还是保持有较高的遗传多样性，可见现有的种子园建园方式是可取的。 3从5l对ESR．SSR引物中筛选了6对可用引物对马尾松优良个体进行遗传多 样性分析，结果表明：多态位点有27个，多态位点百分比(P)高达99％，平均观察 上也可以看出，性状优良的优株较多的聚为一类，推测可能有某些与生长性状有关 的位点相同才使得性状优良的优株和家系拥有较近的亲缘关系。 4．文中用以研究马尾松遗传多样性的两种标记方法各有各的特点，在分析遗传 多样性时ISSR标记便显出较多的多态位点和多样性，且条带稳定，多态性好，可 重复性强。而EST-SSR标记来自表达序列，与性状关联，为分子育种提供条件。从 这个意义上来讲，两种分子标记的信息应该比单一的标记技术获得的信息更为全 面。 关键词： 马尾松； 优良家系；遗传多样性；ISSR：EST-SSR n ABSTRACT raw Chinaandindustrial tree ofSouthern Lambisnative P淤USmassoniana species of thecharacteristics materials，whichpossessing widely 72 from25excellent research family