非核糖体多肽的特征分析和环孢菌高产菌种的诱变选育.pdf

摘要 IIIIIII I IillIIl I IIIIII Y2176346 摘要 非核糖体多肽(nonribosomal 一系列低分子量、具有多种药用价值的多肽类次生代谢产物。目前自然界中己发 现的NRPs有1071种，对这些NRPs的组成、结构、功能和来源进行分析，旨 在对未知功能NRPs的生物学功能进行预测，并设计出具有特定生物学功能的多 肽。研究过程采用基本统计学方法和生物信息学方法，对不同结构、功能、来源 中NRPs的数量进行统计，采用相关分析法分析结构、功能和来源之间的联系， 通过对氨基酸使用频率的计算，阐明非核糖体多肽在氨基酸组成上的特点，以及 这些特点与其结构、功能和来源的联系。 取得的主要研究结果如下： 1．非核糖体多肽的氨基酸单体数目分布在2-49范围内，集中分布于六肽～十 一肽；其结构分为环状和链状，环状比例为69．7％，以单环状(40．5％)和部分 和毒素(1 8．58％)最为常见，这与生物对外界环境的适应性有关，此外还有载铁 蛋白、抗肿瘤、免疫抑制剂和表面活性剂等功能及其复合功能；NRPs主要来源 来源的NRPs占19．14％。 2．行使载铁蛋白功能的多肽结构为链状和分枝状，其中分枝状多肽只行使载 铁蛋白功能，推测链状和分枝状结构在载铁蛋白与铁离子结合的过程中发挥作 用；来源于革兰氏阳性菌和海绵动物的NRPs在结构上有显著相关性(pO．05)， 推测海绵动物体内的NRPs可能是与海绵动物共生的革兰氏阳性菌产生的。载铁 蛋白和表面活性剂功能的NRPs只来源于细菌，主要是革兰氏阴性菌(97．18％， 73．91％)，表明真核生物体内不能合成载铁蛋白和表面活性剂功能的NRPs。 3．脯氨酸(Pro)作为NRPs中使用频率最高的氨基酸，具有形成环状结构、 维持构象稳定的作用；苏氨酸(m)在连接环与环、链与链、链与环结构中起 重要作用；非核糖体多肽的合成必须进行修饰，对多肽链的修饰使多肽链环化， 对氨基酸单体的修饰常见的有差向异构修饰(D一修饰)和N端甲基化修饰(NMe． 随着多肽分子中环状结构比例的增加，NMe一修饰的频率也增加。非蛋白质氨基 酸在环状结构中的使用频率(35．3％)低于链状结构(19．3％)，随着多肽分子 摘要 中环状结构比例的增加，NMe一修饰的频率减小，NMe．修饰氨基酸使用频率与非 蛋白质氨基酸使用频率呈显著负相关(矽0．05)；真菌中的D．修饰频率(3．6％) 显著偏低，说明真菌在合成NRPs时对差向异构修饰的需求不高；细菌中的SMe． 修饰频率(4．21％)亦偏低，说明细菌X,J-N端甲基化修饰的需求也不高；载铁蛋 白没有NMe．修饰，说明载铁蛋白的合成不需要N端甲基化修饰，相反，免疫抑 制剂和表面活性剂的NMe．修饰显著偏高(21．59％，27．53％)，相关性分析表明， 行使免疫抑制剂和表面活性剂功能的NRPs在各类氨基酸的使用频率上有显著相 关性(p0．05)。 根据研究结果，我们总结出NRPs在组成、结构、功能与来源上的主要规律 有： (1)在氨基酸数目上，抗菌素多肽的氨基酸数目在2-20均有分布，其余功 能的多肽数目在13以下，其中抗肿瘤多肽没有二肽、六肽、十一肽、十二肽，毒 素没有三肽，免疫抑制剂只有三肽、四肽、七肽、八肽、九肽、十一肽，载铁蛋 白没有五肽，表面活性剂只有四肽、五肽、六肽、八肽和九肽； (2)在多肽结构上，抗菌素无分枝状结构，抗肿瘤多肽无双环、分枝状结 构，毒素无分枝状结构，免疫抑制剂无双环、链状、分枝状结构，载铁蛋白无单 环、双环结构，表面活性剂无双环、部分环、分枝状结构。分枝状多肽只行使载 铁蛋白功能； (3)在生物体来源上，抗菌素无腔肠动物来源，抗肿瘤多肽无植物、脊索 动物和腔肠动物来源，毒素无脊索动物来源，免疫抑制剂无细菌、软体动物、脊 索动物、腔肠动物来源，载铁蛋白和免疫抑制剂只来源于细菌； (4)在氨基酸的使用上，抗菌素多肽不使用Met，抗肿瘤类NRPs不使用His， 不使用Phe，T