《人类原钙粘蛋白基因簇调控元件的克隆及对其启动子活性的影响.》.pdfVIP

第 18卷 第 2期 生命 科学研 究 Vo1．18 No．2 2014年 4月 LifeScienceResearch Apr．2014 人类原钙粘蛋白基因簇调控元件的克隆 及对其启动子活性的影响 吴海洋，郭 亚，李 伟 ，吴 强 (上海交通大学 系统生物医学研究院，比较生物医学研究中心，中国上海 200240) 摘 要 ：人类原钙粘蛋 白(Protocadherin，Pcdh)基 因簇包含 53个成 串排列非常相似的基 因，组成 3个紧密相连 的基 因簇 (， 和 y)。原钙粘蛋 白基 因簇 通过启动子选择性表达产生神经元细胞膜表面的分子多样性，但 是 ．该多样性产生的分子机制还不清楚。调控元件 HS7L和HS5一laL作为候选的增强子可能具有调控 Pc如 基 因表达 的作用。利用分子克隆的方法 ，将调控元件 HS7L和 HS5一laL分别克隆至包含 ya9、yal0、yb3、yb7和 yc3启动子 的荧光素酶报 告基 因的下游。通过荧光素酶报 告基 因试验检测其对该5种Pedhy启动子活性的影 响。发现 HS7L对5种启动子活性具有增强作用，HS5—1aL对 yal0启动子活性具有增强作用。之后 ，通过基 因 沉默绝缘子 CTCF，发现下调 CTCF不仅 降低 l基 因表达 ，而且能够显著降低 1启动子报告基因活性 。试验 结果表 明调控元件 HS7L和 HS5一laL能够增强Pcdhy启动子活性 ，推测可能通过 CTCF介导的增强子一启动子 相互作用调控 Pc如 的细胞特异性基 因表达。 关键词 ：原钙粘蛋 白基 因簇：选择性表达 ；绝缘子 CTCF；增强子～启动子相互作用 中图分类号：Q71 文献标识码 ：A 文章编号：lOO7—7847(2014)02—0095一O5 CloningandFunctionalAnalysisoftheRegulatoryElements intheHumanPr0t0cadherinGeneCluster wuHai—yang，GUOYa，LIWei，WUQiang (CenterforComparativeBiomedicine，InstituteofSysternsBiomedicine，Shanghai∞ TongUniversity,Shanghai200240，China) Abstract：Promoterchoiceofmembersoftheprotocadheriny (ecahr)geneclusterinsingleneuronsmay generatean enormousdiversityon thecellsurfaceofindividualneuronsin thebrain，buttheunderlying molecularmechanismsarepoorlyunderstood．Here，candidateenhancerelementsofthehumanPcdhyCIus-- ter，HS7LandHS5一laL，wereclonedintothedownstream oftheluciferasereportergenewhichisunderthe controloftheya9，yal0，yb3，yb7，oryc3promoter．Luciferasereportergeneassay，whichwasusedtochar- acterizethefunctionsofthesetwoelements，revealedthatHS7L enhancesthepromoteractivityofallofthe fivegenes；bycontrast，HS5一laL increasestheyalOpromoteractivity．In addition，theinsulatorCTCF knockdownledtoadecreaseinthelevelsofyb1mRNAsanditspromo