UCH37对三种不同二泛素的水解作用及其水解动力学的研究.pdfVIP

UCH37对三种不同二泛素的水解作用及水解动力学 中文摘要 中文摘要 C—terminal 泛素(Lys48．，Lys63一，线性泛素)之间异肽键的水解作用，同时探究用分子生物学 ．荧光的方法检测并计算UCH37N的水解活性。第二部分研究了Ce3+元素在缺 M92+和有M92+条件下，对植物氮代谢和叶绿体抗氧化系统的影响。 第一部分： 泛素羧基端水解酶是去泛素化酶五个家族中的一个，它可以特异性切除泛素 羧基端融合的氨基酸或小分子。在已发现的UCHs家族中，UCH37是唯一能和26S 蛋白酶体中的19S亚基相互作用，从远端开始水解Lys48．方式连接的多泛素链。 等都没有水解二泛素的活性，但UCH．domain能识别泛素并水解小分子底物。我 泛素之间异肽键的活性，为了较系统的研究UCH37N对不同二泛素的水解作用及 上直接表达的直链二泛素共三种，作为酶切反应的底物。在反应终止后用Ni-NTA 柱亲和层析的方法除去反应体系中带有His6．tag标记的蛋白，然后通过荧光测定反 果显示，泛素羧基端水解酶UCH37N不能水解直链二泛素，对另外两种二泛素的 水解活性也有一定差异，可能与UCH37在体内的功能有关。 中文摘要 UCH37对三种不同二泛素的水解作用及水解动力学 第二部分： 这部分工作主要研究了在缺镁和正常条件下Ce3+对菠菜氮代谢以及对菠菜 叶绿体抗氧化系统的影响，主要内容包括： 1．研究了在缺镁和正常条件下，Ce3+对菠菜氮代谢系统的影响。实验方法： 将菠菜分别培养在缺镁和完全培养基中，分别对其进行Ce3+处理，不加Ce3+处 理的作为对照。培养一段时间后对植物体内氮代谢各项指标进行检测，如硝酸还 原酶，亚硝酸还原酶，谷氨酸脱氢酶，谷氨酸合酶，谷丙转氨酶，谷草转氨酶等。 研究结果发现，在缺镁条件下，植物体内的氮代谢受到明显抑制，从而影响植物 有机物的合成，进而影响植物的生长。Ce”处理后，菠菜体内氮代谢的症状可以 被明显缓解，同时，有机物、叶绿素和可溶性蛋白的含量等较缺镁条件下明显提 高。实验结果表明，在缺镁条件下，Ce3+可以部分取代镁促进无机氮转化成有机 氮，进而促进植物的生长。 2．通过检测活性氧族在菠菜叶绿体中的积累，研究在缺镁条件下菠菜的氧化 应激水平。缺镁培养下，菠菜叶绿体中膜脂过氧化物增多，通过检测超氧化物岐 化酶，过氧化氢酶，抗坏血酸过氧化物酶，谷胱甘肽还原酶的活性以及抗氧化剂 谷胱甘肽和类胡萝卜素的含量，结果表明活性氧族的攻击激活抗氧还原化系统的 抵御。研究还发现，当缺镁培养下，菠菜叶绿体中抗氧化能力下降，明显抑制植 株的生长，出现叶子枯萎等症状。但在缺镁的条件下用Ce”处理菠菜会降低缺镁 引发的症状及活性氧族的水平，提高抗氧化防御系统的活性，促进菠菜的生长。 总之，实验研究表明在缺镁的条件下，Ce3+可以部分取代镁，增加菠菜叶绿体抵 御氧化损伤的能力。 关键词：泛素；去泛素化酶；UCH37；镍柱亲和层析；菠菜；缺镁；Ce“；氮 代谢；叶绿体； 抗氧化系统 作 者：殷四涛 指导老师：洪法水 胡红雨 II The substrate and kineticsof specificityhydrolysis ne7cId3HCenUU 1 biquitinatingblqUltlnatlng enzymeYme Abstract PartI C—terminal