MBP和HO-1在复发缓解型EAE大鼠长期、自然病程中的表达及α-硫辛酸的保护作用.pdfVIP

中文摘要 应用硫辛酸对大鼠进行药物干预，观察硫辛酸对大鼠脊髓组织病变的影 响，从而探讨0【．硫辛酸对MS脊髓组织中髓鞘损伤是否具有保护作用及可 能的机制，为进一步研究CNS脱髓鞘疾病脊髓组织损伤的机制及修复提 供实验依据。 方法：l动物分组 只大鼠用豚鼠全脊髓匀浆复合抗原成分免疫诱导，建立EAE模型，待大 鼠发病后，再随机分为EAE组、硫辛酸组(LA组)，每组再按病程分为 d期。硫辛酸组自第一次发病起即给予药物腹腔注射， 发病后7d期、180 l00 mg·kg-l·d一，连续注射7天。 2动物模型的建立 取豚鼠脊髓全长，去除脊膜并称重，按脊髓重量与冰盐水体积为1： 10比例制成豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)，再与等量含6 mg／mL卡介苗的完全 福氏佐剂(CFA)充分混合，冰上抽打制成油包水乳剂，为完全免疫抗原。 按0．5mL／只分别于大鼠四肢足垫及背部皮下注射抗原匀浆，建立EAE动 物模型。 3神经功能评分 免疫后，每日观察所有动物体重变化、精神状态及活动情况，并进行 神经功能评分。采用国际通用的Kono评分标准。 4组织病理学 于发病后第7d(发病当日为第0d)及180d时各取大鼠3只。用lO％ 水合氯醛(350 mg／kg)腹腔注射麻醉，迅速取脊髓腰膨大段组织固定于 40∥L多聚甲醛中，石蜡包埋，组织切片。行HE染色，光学显微镜下观 察病理学改变。 5免疫组织化学染色 la 取动物脊髓腰膨大处组织，石蜡包埋，做5 m横截面切片，血清封 闭，加髓鞘碱性蛋白(MBP)、血红素氧合酶．1(HO．1)的一抗，经二 抗、三抗孵育，DAB显色，苏木精复染，脱水透明，中性树胶封片，光 学显微镜下观察MBP的表达情况。 结果：1HE染色结果 首次发病后7d期EAE组大鼠脊髓腰膨大组织中可见有单核、淋巴 中文摘要 样细胞浸润，呈片状或成簇样聚集，在脊髓灰、白质交界区内小血管周围 可见典型血管“套袖样改变。硫辛酸组脊髓组织也有单核、淋巴样细胞浸 润，但程度较EAE组轻。对照组大鼠脊髓组织少有或无明显单核、淋巴 样细胞浸润。发病后180d期EAE组脊髓组织灰、白质内仍可见少量炎 性细胞浸润、血管“套袖样”改变及胶质结节形成。发病后180d硫辛酸 组和对照组大鼠脊髓组织病理学检查未见明显异常。 2免疫组织化学染色结果 2．1脊髓组织中MBP免疫组织化学染色表达差异比较： d时MBP表达 结果显示：对照组MBP表达量多；EAE组发病后7 量减少，180d时表达量有所增加；经LA药物干预后MBP表达量增加。 发病后7 2．2脊髓组织中HO—l免疫组织化学染色表达差异比较 d 结果显示：对照组HO．1有所表达，但个数很少；EAE组发病后7 HO．1表达增多，180d时表达有所减少，但较对照组仍多；经LA药物干 d时HO．1表达较对照组增多。发病后 预后HO．1阳性表达有所下降，180 80 d期EAE组与对照组之间有统计学意义(PO．05)。发病后1d期LA 组与对照组之间有统计学意义(PO．05)。 结论： 1 在炎症反应、髓鞘损伤。 2 EAE大鼠脊髓组织中MBP、HO一1的表达均与病情活动性相关，不同 时间呈一定的变化趋势，药物干预引起各指标含量变化。 3硫辛酸对EAE大鼠髓鞘损伤有一定保护作用，其保护作用可能是通过 抗氧化作用来实现的。 关键词：多发性硬化；实验性变态反应性脑脊髓炎；小剂量；长病程； 髓鞘碱性蛋白；血红素氧合酶．1；Q．硫辛酸；氧化应激 The ofM