裂殖酵母蛋白Stc1及人源NSD3PHD5-C5HCH结构域结构与功能的研究.pdf

J㈣岈幽 ofScienceand ofChina University Technology Adissertationfordoctor，S degree —I一 一 一■一 一● ， 5trUCtUre ot ana卜UnCtIon thefission nStcl yeastprotei andthePH D5-．C5HCHdomain ofhu N manSD3 Author’S NameChaoHe Speciality： StructuralBiology ShiProf．JihuiWu Supervisor：Prof．Yunyu time： Fini．shed 4m，2012 May 摘要 摘要 NMR 在此论文中，我们用多维核磁共振波谱学(multidimensional 的方法解析了裂殖酵母中联系RNAi与染色质修饰的蛋白质Stcl的N端保守区 域串联锌指结构域的溶液三维结构以及用X射线晶体学(X-ray 的方法解析了人源组蛋白甲基转移酶NSD3的C末端串联PHD结构域与组蛋白 H3尾巴的复合物的高分辨率的三维结构。 本论文将分四个章节来阐述。 第一章介绍Stcl所参与的裂殖酵母着丝粒区域RNA干扰介导与异染色质组装 相关的修饰的背景综述。RNA干扰是一类保守的由小RNA参与的基因沉默机制。 这种沉默可以是转录后水平的，通过转录本的剪切和翻译的抑制，也可以是转录 水平的，即通过染色质的修饰。人们已经发现在真核生物中小RNA依赖的染色 产生的H3K9甲基化的建立和维持都是必需的。着丝粒周边转录本被处理成 siRNA及与异染色质因子的结合都有助于着丝粒周边重复转录本的沉默及异染 何和染色质修饰联系起来。英国的研究小组在与裂殖酵母着丝粒周边异染色质完 体内既能与RITS(A901)又能与CLRC相互作用。 第二章重点讲述我们对于Stcl的研究方法和实验结果。我们解析了Stcl保守 的N端区域的溶液结构。该结构揭示了Stcl实际上包含两个串联的没有固定相 对取向的锌指模块，与之前预测的LIM结构域有差异。我们通过核磁弛豫和残 留偶极耦合分析也证实了这一点。同时我们发现C端富含带负电的天冬氨酸和 谷氨酸的非保守区域在溶液中是天然无序的。为了剖析Stcl结构与功能的关系， 我们与Bayne实验室合作。她们通过体内、体外实验分析发现N端两个锌指模 子机理层面解释了Stcl介导的RNAi与染色质修饰的联系。 第三章简要归纳组蛋白H3K36甲基化的背景信息。从酵母到哺乳动物中都发 SET 现有H3K36的甲基化。NSD(nuclearreceptor 富含的C5HCH结构域。目前对这类酶的催化区域的性质和底物的特异性已研究 摘要 得比较深入，但是这类酶是如何被定位和调控的还知之甚少。因此，我们关