PDX-1基因克隆载体体外构建.pdfVIP

目 录 一 英文缩略词表…………………………………………………………1 二 中文摘要………………………………………………………………2 三 英文摘要……………………………… ………………………………4 四 前言…………………………………… ………………………………7 五 体外构建 PDX-1 基因克隆载体………………………………………9 1 材料与方法………………………………………………………………9 2 结果……………………………………………………………………18 3 讨论……………………………………………………………………24 六 体外诱导人脐带间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化…………27 1 材料与方法……………………………………………………………27 2 结果……………………………………………………………………33 3 讨论……………………………………………………………………40 七 结论…………………………………………………………………43 八 参考文献……………………………………………………………44 九 附录一：个人简历………………………………………………49 十 附录二：致谢…………………………………………………………50 十一 综述及参考文献…………………………………………………51 4 英文缩略词简表 MSCs mesenchymal stem cells 间充质干细胞 PDX-1 pancreatic duodenal homeobox-1 胰-十二指肠同源框 1 DM diabetes mellitus 糖尿病 DMSO dimethylsulfoxide 二甲基亚砜 bFGF basic fibroblast growth factor 碱性成纤维细胞生长因子 EGF epidermal growth factor 表皮细胞生长因子 IR insulin resistance 胰岛素抵抗 GLP-1 glucagon-like peptide-1 胰高血糖素样肽-1 1 摘要一 PDX-1基因克隆载体的体外构建 摘要 目的：构建 PDX-1 基因的克隆载体，为真核表达载体的构建及研究 PDX-1 诱导干 细胞分化的作用机制提供基础。 方法：采用 Trizol 方法从大鼠胰岛细胞瘤细胞株中提取 RNA ，通过 RT-PCR 方法 在体外扩增大鼠 PDX-1 cDNA ，琼脂糖凝胶电泳鉴定，割胶纯化后回收目的基因， 与 pMD-18T 克隆载体连接构建，经限制性内切酶双酶切及 DNA 序列分析鉴定 pMD-18T-PDX-1 的正确构建。 结果：正确构建了含有 PDX-1 cDNA 的克隆载体pMD-18T- PDX-1 ，其中PDX-1 cDNA 全长为 908bp 。 结论：在体外成功克隆了 PDX-1 基因，并正确构建了 PDX-1 基因克隆载体，对进 一步进行PDX-1 在真核细胞中的表达及研究 PDX-1 在干细胞定向分化中的作用具 有重要的意义。 关键词：PDX-1 cDNA 胰岛细胞瘤 克隆载体