抗菌肽Thanatin基因载体构建和表达及提高植物对菌核病抗性的研究.pdf

中文摘要 抗菌肽是生物体防御系统产生的一类对外源病菌具有高效杀灭活性的小分子多 细菌以及真菌都有很强的抗菌活性，本研究通过转基因技术将其转入模式植物拟南芥 和油菜，以提高植物的抗病性尤其是对菌核病的抗性。 1 Thanatin的融合植物表达载体的构建 3’端设计了BglⅡ切点，LP．Thanatin 同尾酶的特点，LP-Thanatin Bgl 止密码子(TAG)构建成可剪切多拷贝抗菌肽融合植物表达载体。结果鉴定1—5拷贝 的Thanatin融合植物表达载体构建成功。 2转基因油菜和拟南芥的获得 通过农杆菌介导和In 转化油菜和拟南芥，由于转油菜的周期长和效率低，目前我们只获得5拷贝的To代 转基因油菜，而获得了卜5拷贝的全部转基因To代拟南芥，对转基因油菜和拟南芥 进行菌核病抗性鉴定，结果显示转基因植株中并无预期中的高抗菌核病类型。 3Ihanati n的亚细胞定位和原核表达 构建SP—Thanatin．GFP融合基因，利用基因枪轰击洋葱表皮。洋葱表皮细胞瞬时 表达融合蛋白，在荧光显微镜下观察显示荧光蛋白特异性地定位于细胞间隙，表明信 号肽能成功的将目的蛋白引导到细胞外。同时构建Thanatin的原核表达载体 证明Thanatin能在大肠杆菌中表达且效果良好。 关键词：菌核病；甘蓝型油菜；拟南芥；转基因；Thanatin基因；原核表达 Abstract isasmall with antimicrobial Antimicrobial exterior peptide peptidehigh activityagainst form a11 roleinthe pathogencomingrecoverysystemoforganism．Itplayimportant project Of diseaseresistance 21-residue aninducible plant improvement．Thanatin，apeptide，is insect withabroad ofantimicrobial bacteriaand this peptide range activityagainst fungi．In the hasbeenusedtotransformto diseaseresistance to gene plants especially study improve Sclerotiniascolerotiorum． 1ConstructionofThanatinfusionvectorsfor expression plant Baseonthe inGenBank．weconstructthe witll5’fusion sequence genes signalpeptide orlink then wereclonedin 8-Tvector．SP—Thanatincontained peptide，andthey pMDl agl IIin3’andLP—ThanatincontainedBamHIin IIandBamHI havethesame 5’Bgl o