免疫学课件——第九章标记技术..pptVIP

第九章 标记技术 在凝聚性试验中,由于影响因素太多,有时难以出现预期的结果,试验的精确度也不高. 有一些物质在超微量时,就能用某种特殊理化因素将其检查出来.如果将这些物质标记在抗体分子上,就能利用抗体与抗原结合的特性,将抗原检查出来,这就是免疫标记技术. 标记技术目前有:荧光抗体技术,酶标记抗体技术,同位素标记抗体技术,铁蛋白标记抗体技术. 特点:高灵敏度,可以定性,定量,定位测抗原. 一.荧光抗体技术 荧光素在10-8超低浓度时,仍然可被短波光激发,发出明亮的,肉眼能够感知的荧光. 免疫试验用到的荧光素有异硫氰酸荧光素(FITC),四乙基罗丹明(RB200),四甲基异硫氰酸罗丹明(TMRITC).其中应用最广的是异硫氰酸荧光素,为黄色结晶状粉末,分子量389,有Ⅰ,Ⅱ两种异构体,易溶于水和酒精,性质稳定,低温干燥可保存多年,能与蛋白质良好结合,异构体Ⅰ效果更好,它的最大吸收光谱为490-495纳米,最大发射光谱为520-530纳米,呈明亮的黄绿色荧光. 一.荧光抗体的制备 ★免疫动物 ★抗体提纯 盐析,分子筛层析,离子交换层析,亲和层析 ★荧光素标记 以直接法为例,在0.5MpH9.5的的碳酸盐缓冲液中稀释IgG浓度至2％,取相当于蛋白质量1/100—1/150的FITC溶于相当于IgG溶液量1/10的pH9.5碳酸盐缓冲液中,将FITC溶