分子生物学课件分子杂交..pptVIP

* * 第八章 聚合酶链反应 1985年PE-cetus公司的人类遗传研究室Mullis等人发明了具有划时代意义的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)。此技术能够特异地扩增任何所希望的目的基因或DNA片段。在基础和临床医学、法医、考古等方面有重要的应用价值，并对分子生物学技术的发展给予巨大的推动。 第一节 PCR原理与特点 第二节 PCR类型 第三节 PCR技术在医学上的应用 一、PCR的基本原理 在试管中给DNA的体外合成提供一种合适条件——模板DNA，寡核苷酸引物，DNA聚合酶，合适的缓冲液系统和DNA变性、复性及延伸的温度与时间等，使目的DNA得以迅速扩增(图8-1)。 ㈠ DNA模板变性 双链DNA是通过94℃左右的高温使其发生变性，形成单链DNA。 ㈡ 模板与引物退火 将合成的两个寡核苷酸引物分别与待扩增DNA两端的序列互补。通过控制退火条件，引物就能准确地与扩增区域的两端配对。 ㈢ 引物延伸 在4种dNTP底物及Mg2+存在条件下，DNA聚合酶在最适作用温度可将单核苷酸从引物3′端掺入，沿模板延伸合成新股DNA，每一循环的产物可作为下一循环的模板。 以上所述的变性、退火、延伸“三步曲”被确定为PCR的一轮循环，整个PCR过程一般需进