纤维素结合域酿酒酵母表面展示系统构建和纤维粘附位点及研究.pdfVIP

中文摘要 反刍动物能够高效利用纤维物质为自身机体提供能量，主要依赖于瘤胃中大 量的具有纤维分解能力的微生物。研究表明只有与饲料颗粒紧密结合的微生物才 直接负责纤维物质的降解作用，于是，瘤胃微生物对纤维物质的粘附成为纤维降 解的首要条件。微生物对纤维物质的粘附包括非特异性粘附和特异性粘附，有四 种结构被认为与瘤胃微生物特异性粘附有关，多纤维素酶体、菌毛粘附素、多糖 蛋白复合物层的碳水化合物抗原决定簇和酶的纤维素结合域(cellulose．binding domain，CBD)。 本研究利用酿酒酵母表面展示系统表达产琥珀酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogenes)S85纤维素结合域(cellulose-binding 面。利用免疫组化技术(Anti．V5．FITC荧光抗体标记)监测重组酵母细胞在稻草 茎细胞壁上的粘附位点。 结果显示CBD2对稻草厚壁组织、薄壁组织和维管组织细胞均有粘附，且荧 光强度与细胞壁的厚度一致；CBD6粘附稻草片的厚壁组织和维管束，但是荧光 强度较弱，CBDll可粘附稻草的厚壁组织和维管束，粘附量较少，荧光强度较 弱。CBD2多序列比较和对三维结构分析显示本研究产琥珀酸丝状杆菌$85的 CBD2是CBD2A型，能够粘附结晶性纤维素。现有资料显示，CBD6能与半纤 维素(木葡聚糖、13．1,4．葡聚糖和13．1，3．葡聚糖)粘附，CBDll与非结晶性纤维 素结合，而且CBD6和CBDll的粘附能力较CBD2弱，这与本研究结果一致。 综上所述，本试验研究表明利用酿酒酵母表面展示系统研究纤维素结合域在 复杂的纤维物质上的粘附位点是可行的。来自产琥珀酸丝状杆菌$85的CBD2、 CBD6和CBDll在稻草切片横断面上的粘附位点和粘附量都存在差异性。 关键词：纤维素结合域；酿酒酵母表面展示；粘附位点：稻草；产琥珀酸丝状杆 浙江太堂亟±论塞 生塞擅要I_———————一 菌$85 2 ABSTRACT Ruminantanimalscallusefibermaterialto is provideenergyefficiently,which ontherumenwhichcontainsa numberofmicrobeswiththe of dependent large ability showedthat withfeed fiber researches onlycombining particles fermentation．Many be in theadhesionof canthemicrobes offermentation．Soability directlycharge is offirberfermentation． microbesinrumen inthe significantlyimportantprocess Microbes‘adhesiontofibermaterialsincludes adhesionand nonspeciflc specificity adhesion．Theadhesionincludes adhesins， specificity multi-enzym