EM-200---肠三叶因子介导PI3KAkt信号通路保护胃粘膜上皮细胞紧密连接.pdfVIP

肠三叶因子介导PI3K/Akt 信号通路保护 胃粘膜上皮细胞紧密连接 孙兆瑞，杨志洲，徐洋，刘红梅，邵旦兵，林金锋，徐敏，聂时南 江苏 南京 南京军区南京总医院急救医学科 南京大学医学院附属金陵医院 210002 通讯作者：聂时南，南京市中山东路305号南京军区南京总医院急救医学科 【摘要】目的: 探讨肠三叶因子对胃粘膜上皮细胞紧密连接的保护作用，并研究 PI3K/Akt 信号通路在其中的作用机制。方法：体外培养GES-1 细胞，分别设正常对照组： 正常培养，未做任何处理；LPS 组：加入浓度为10 µg/ml 的LPS (Lipopolysaccharide) ；ITF 组：加入浓度为100ng/ml 的ITF (intestinal trefoil factor) ；LPS+ITF 组：加入浓度为10 µg/ml 的LPS，同时加入100 ng/ml 的ITF；LPS+ITF+LY294002 组：加入浓度为10 µg/ml 的LPS 、 100 ng/ml 的ITF，同时加入PI3K/Akt 信号通路的抑制剂LY294002 (15 μM) ；ITF+LY294002 组：加入100 ng/ml 的ITF，同时加入15 μM 的LY294002，以上各组加入不同药物后，继 续培养48 h ，进行后续实验。采用Western blot 检测ITF 对GES-1 细胞PI3K/Akt 信号通路 的作用；采用免疫荧光检测GES-1 细胞紧密连接的变化情况；随后采用Western blot 检测紧 密连接蛋白Occludin 和ZO-1 的表达情况。结果：Western blot 检测结果说明，与对照组相 比，ITF 提高了pAkt 蛋白的表达水平，而LY294002 抑制了ITF 激活的pAkt 蛋白的表达， 说明 ITF 可以通过激活 PI3K/Akt 信号通路来调控 GES-1 细胞的生理活动。免疫荧光和 Western blot 结果显示LPS 导致GES-1细胞的紧密连接遭到破坏，降低紧密连接蛋白Occludin 和ZO-1 的表达水平，而ITF 可以通过激活PI3K/Akt 信号通路来保护GES-1 细胞的紧密连 接的完整性，提高Occludin 和ZO-1 的表达水平。结论：ITF 保护胃粘膜上皮细胞紧密连接 的完整性，提高紧密连接蛋白的表达水平，其发挥作用的主要分子机制是通过激活PI3K/Akt 信号通路来实现的。 【关键词】GES-1 细胞；肠三叶因子(ITF)；紧密连接；PI3K/Akt 信号通路； 胃粘膜屏障的损伤与攻击因子和防御因子之间的不平衡相关，在防御因子功能降低，而 [1] 攻击因子活动加强，会造成胃粘膜屏障功能障碍，引起胃粘膜出现溃疡 。该屏障的完整性 是胃粘膜得到保护和消化性溃疡得以防止的重要基础。脂多糖（LPS ）可诱发机体炎症反应， 能够导致胃粘膜屏障损害，从而引起胃粘膜屏障通透性增高，最终导致胃溃疡的发生。肠三 叶因子(intestinal trefoil factor, ITF)属于三叶肽家族(TFF)，是一类小分子多肽物质，主要在小 [2] 肠及结肠杯状细胞、胃窦粘膜中表达 ，具有促进损伤粘膜细胞再生和腺体、组织修复，增 [3-5] 加粘膜血流量等作用，对胃粘膜损伤后的完全修复起至关重要的作用 。ITF具有很强的细 胞保护作用，能够促进胃粘膜上皮细胞迁移，减轻多种损伤因子介导的粘膜损伤，促进细胞 [6] 增殖，抑制细胞凋亡，增加粘膜血流量，因而在胃肠道自我保护机制中占据重要地位 。ITF 在维持胃粘膜上皮细胞的完整性，保护胃粘膜屏障功能，恢复粘膜正常通透性中起到重要作 用，然而ITF发挥保护作用的具体分子机制尚未阐明。本文主要以体外培养的胃粘膜上皮细 胞株GES-1为模型，观察LPS对胃粘膜上皮细胞紧密连接的影响，并初步探讨ITF保护粘膜