构巢曲霉中钙信号系统中三种新蛋白MidA、CchA及其ActnA的可调控启动子替换、荧光标记和功能研究.pdf

南京师范大学 构巢曲霉中钙信号系统中三种新蛋白 MidA 、CchA 及 ActnA 的可调控启动子替换、荧光标记和功能的研究 构巢曲霉中钙信号系统中三种新蛋白 MidA、CchA 及 ActnA 的可调控启动子替换、荧光标记和功能的研究 摘要 极性生长是真核生物的一个主要特征。钙信号途径参与了细胞极性的建立和 维持进程的调节。对于一些真菌的研究表明，CchA、MidA 、ActnA 这三种蛋白 都参与了钙信号的调节作用。然而，在构巢曲霉内，这三种蛋白的研究尚未见报 道。 本文利用先进的荧光蛋白标记技术和基因替代的方法，构建了带有酒精启动 子调控、荧光蛋白标记的构巢曲霉同源整合菌株。CchA、MidA 缺失的菌株，菌 落生长速度受到一定的抑制。利用钙通道螯合剂处理这两个突变菌株后，菌落生 长速度受抑制的现象更加明显；增加钙离子浓度后，菌落生长速度有所加快。这 表明 CchA、MidA 很可能是钙通道蛋白。由于两者突变后表型类似，我们推测 两者可能是两条不同的钙通道，有补充叠加的作用。用 CFP 标记 MidA 的菌株 其荧光在孢子和整个菌丝内都有分布，但在孢子的膜上较弱，菌丝内也较弥散； 而用 YFP 标记 CchA 的菌株的荧光集中分布在孢子外侧的膜上，绕孢子呈完整 的一圈。这表明这两个蛋白可能都是位于细胞膜上发挥功能的钙通道蛋白。 ActnA 缺失的菌株菌落边缘不整齐，呈扇形，菌丝进行二分叉，这说明 ActnA 是 与极性生长有关的蛋白。用 GFP 标记 ActnA 的菌株其荧光定位表明该蛋白在菌 丝内呈双股平行的丝状分布，这与 actin 细胞骨架蛋白的结构有些相似，这表明 ActnA 可能是 actin 的辅肌动蛋白，他们共同参与极性的调节。我们推测 ActnA 还可能参与钙信号途径，ActnA 的突变也影响钙信号，从而破坏 actin 的结构， 使突变菌株极性部分破坏。在构巢曲霉内，对钙信号系统中 CchA、MidA 、ActnA 这三种蛋白的研究尚属首次，这对进一步研究和了解构巢曲霉内钙信号通路的分 子机理有十分重要的意义。 关键词：信号途径 极性 钙通道 构巢曲霉 I 南京师范大学 构巢曲霉中钙信号系统中三种新蛋白 MidA 、CchA 及 ActnA 的可调控启动子替换、荧光标记和功能的研究 Study on Promoters replacement，Fluorescent labeling，function of three new proteins MidA，CchA and ActnA in Calcium signaling system in Aspergillu nidulans ABSTRACT Polarized growth is a central feature in eukaryotes. Establishment and maintenance of cell polarity are coordinated by calcium signaling pathways. CchA ， MidA and ActnA are involved in calcium signaling in some eukaryotic cells.However, the function of the three proteins in A.nidulans hasn’t been reported yet . We constructed homologous integration strains with the alcohol promoter and fluorescence markers by gene replacement a