原子力显微镜在结构生物学中的应用.pdfVIP

维普资讯 电子显微学报 J Chin．Electr．Microsc．Soc 15(2— 4)：3l4～328 1996年 原子力显微镜在结构生物学中的应用 理和生物物理系，姜 国 弗吉尼亚州 ，夏洛茨维尔 22908) 学 于 摘 要 一 医 力 学 ForceMicroscopy，简祢 AFM)已经成 为发展最快 的成像技术之 院 生特 学 中的应用 ，其重点在高分辨成像．其 中包括它对细胞膜表 面、DNA、可溶性蛋 白瘦膜蛋 白的观测。除了在室温溶液 中的应用 ，我们进一步评述最新发展 的低温 原于力显徽镜 (Cryo—AFM)：这些最新 的结果显示 ，AFM 诈为一项独立 的结构研究方法 已日臻成熟 ． 其应用范围日渐广泛。由于此项技术具有低成本、低消耗釉 高分辨的优点．并仍处在 高速发展的阶 段 ，艰适于广泛推广并应用于不 同的领域=我们认为 ．AFM 将在不九 的将 来成为生特学 中不可缺少 的一个主要方法 关键词 低显l 三 旦坠 6 一 、 引 言 扫描探针显微学 (ScanningProbeMicroscopy，简称 SPM ，包括 ScanmngTunnelingMi— croscopy(STM)，AtomicForceMicroscopy(AFM)等)的诞生和发展是二十世纪下半叶成像技术 中最重要的进展之一。在扫描 电镜 (SEM)[1：和扫描透射 电镜 (sTEM)0-中，扫描探针用的是 电子 束}在共聚焦显微镜中，扫描探针是光束0 ；而在扫描隧道显微镜(STM)中扫描探针用的则是一 个很小尺度的导电探针 ，在原子力显微镜 (AFM)中是用一个在灵敏的微悬臂上的针尖 “ 。虽然 以上各种方法都已成功地应用于观测生物样品上，但其中最引人注 目或许就是最新发明的原子力 显微镜。自从 1986年AFM 问世以来，AFM 应用于生物领域的文章飞速增长 “ 。其原因就在于 AFM 所具有的独特优点：即可以在生理溶液中直接成像、分辨本领可达纳米量级、可以应用于非晶 样品，等等 ‘。另外一个值得注意的优点是其相对低廉的价格，一般的实验室很容易引进这套技 术，而不需要复杂的训练。尽管STM应用在生物领域也有很大的可能性，但由于 目前尚没有一个 成熟的理论来解释 STM 在非导体表面成像的机制 ，而在样品表面喷镀导电层 (金膜或碳膜) 又会使分辨率大大的降低，这使得它的广泛应用受到限制 。因此 ，在这篇简要评述中，我们将不涉及 STM 在生物领域的应用。有兴趣的读者可以参考其它的评述0 。 AFM 的工作机理非常简单 ，它通常使用氮化硅作为一个灵敏的弹性微悬臂，在其尖端有一 个很尖的探针用来在样品上扫描 (可 比较 SEM 的成像方式)。一般微悬臂的弹性系数可 以很低， 远小于0．5N／m口 。AFM 有两种基本的工作模式：在恒高模式中，保持样品和探针间的距离不 变 ，测量每一点作用力的大小；在恒力模式中，用反馈系统保持样品和探针 问的作用力不变 ，测量 每一点高度的变化。此两种模式皆可得到与表面形貌有关的信息。AFM 具有很宽的工作范围， 观测的生物样品可 以是整个细胞或单个分子。在这篇评述文章中，我们将重点放在 AFM 在生物 学应用中的最新进展．包括在细胞膜上直接观测到 exocytoticpits口、核膜孔 。”、细胞骨架的重 来稿 日期：1996年 2月 5日 通信作者 维普资讯 电子显徽学报 J．Chin．Elec