应用高压冷冻-冷冻置换技术研究受potyvirus侵染的寄主细胞超微结构.pdfVIP

第 29卷 第2期 电 子 显 微 学 报 Vol一29，No．2 2010年4月 JournalofChineseElectronM icroscopySociety 20l0．04 文章编号：1000-6281(2010)02。0146．06 应用高压冷冻 一冷冻置换技术研究受Potyvirus 侵染的寄主细胞超微结构 郑 瑛 ，洪 健 ，祝 建。，陈集双 (1．浙江理工大学生物工程研究所，浙江 杭州310018；2．浙江大学分析测试中心， 浙江 杭州 310029；3．同济大学生命科学与医学工程研究院，上海 200092) 摘 要：应用高压冷冻 一冷冻置换技术(HPF—FS)制备 了马铃薯Y病毒属的小西葫芦黄花叶病毒 (ZYMV)和大豆 花叶病毒(SMV)侵染寄主植物叶细胞的超薄切片样品，并与传统化学固定方法进行比较。透射 电镜观察结果显 示 ：病毒粒子和 内含体的形态分布在两种方法处理的样品中无 明显差异，但高压冷冻样品的细胞超微结构精细 ，细 胞壁与细胞质之间边界清晰，质膜平滑而完整，细胞基质丰富；细胞核和叶绿体、线粒体等形态饱满，高尔基体潴泡 结构及分泌小泡清晰，在 ZYMV感染细胞 的叶绿体 中观察到囊泡结构。而化学处理的样品普遍存在细胞结构的收 缩和变形，特别是质膜褶皱 ，与细胞壁分离，叶绿体呈梭形，片层结构发生改变，高尔基体潴泡结构及分泌小泡相3- 少见。实验结果有利于正确 区别病毒所引起的细胞病理变化和化学处理而产生的人工假象。 关键词 ：高压冷冻 一冷冻置换 ；小西葫芦黄花叶病毒 ；大豆花叶病毒 ；超微结构 中图分类号 ：Q939．4；Q336 文献标识码 ：A 马铃薯Y病毒科(Potyviridae)包括马铃薯Y病 植物。SMV侵染大豆叶细胞会出现 叶绿体肿胀，片 毒属 (Potyvirus)、甘薯病毒属 (Ipomovirus)、石橙病 层结构解体 ，细胞核 固缩，核膜 降解 ，异染色质边 毒 属 (Macluravirus)、黑 麦 草 花 叶 病 毒 属 聚，核仁融解等现象 。 (Rymovirus)、小麦花叶病毒属 (Tritimovirus)和大麦 电子显微技术从来都是研究植物病毒必不可少 黄花叶病毒属 (Bymovirus)六个属 ，大部分是侵染 的手段之一。但传统 的样 品制备过程采用化学 固 农作物的重要病毒。Potyviridae成员引起 的细胞病 定、脱水常产生各种人工假象 ’ ，使其所展现寄主 理变化复杂 ，有多种基 因表达产生 的内含体存在于 细胞的超微结构细节失真。近些年发展起来的高压 寄主细胞内，最具特征的是由70kD的cI基因编码 冷冻 一冷冻置换技术 (HPF—FS)有望解决这一技术 的柱状 内含体 。Edwarson根据其横截面 的形态分 难题 ¨ “。一般的快速冷冻 固定法使样 品达到玻 成4个类型：I型具有风轮体和卷简体 ；II型具有臂 璃化程度的冷冻深度在20 m左右 ，高压冷冻法则 伸展的风轮体和长片层聚集体 ；III型具有风轮体 、卷 可达到200tim，是 目前动植物组织样品最好 的物理 筒体和长片层聚集体 ；1V型具有风轮体 、卷筒体和短 固定方法之一。在过去的十多年中HPF—FS已成功 而弯曲的片层聚集体 。 应用于各种植物组织根 、茎、叶、花药、子房和悬浮细 小西葫芦黄花 叶病毒 (Zucchiniyellowmosaic 胞等的研究¨ 。本文利用 HPF-FS和传统化学 virus，ZYMV)属于Potyvirus，是侵染葫芦科作物的主 固定两种技术制备感染 Potyvirus病毒的植物叶片样 要病毒 ，在全球均有分布。病毒为弯曲的线状粒子， 品，对细胞超微 结构变化进 行 比较分析，以了解 长度 750nm，直径 11rim，无包膜。受 ZYMV侵染的 HPF．FS在植物病毒细胞病理学研究中的技术优