家蚕抗浓核病毒（中国镇江株）分子标记相关基因及研究.pdf

江蒸叁芏塑主芏堡垒塞 摘 要 家蚕是重要的经济昆虫，也是鳞翅目的模式昆虫。家蚕浓核病毒 是蚕业生产上危害比较严重的一类病毒。目前为止在家蚕中共发现了 3种浓核病毒，中国镇江株与DNV一2型相似，但是在血清学上存在差 15号染色体的另一个隐性基因nsd-z控制。本论文从DNA入手利用 RAPD技术筛选与抗性基因连锁的分子标记，并转换成SCAR标记，为 分子标记辅助育种育种奠定基础。同时采用近等基因系结合荧光差异 显示技术研究了家蚕对浓核病毒的抗性相关基因，其主要研究结论如 下： 1．在抗DNV的品种秋丰d、高感品种华八35及其近等基因系Bc。 扩增，获得了一个与家蚕抗DNV基因相关的分子标记$366。对这个 标记进行了克隆、测序，并且根据序列设计特异引物转换成SCAR标 记。在多个敏感性和抗性品种中进行验证，证明此分子标记真实可靠。 通过生物信息学对测序片段进行分析，发现该片段序列与黄嘌呤脱氢 酶基因有91％的同源性。黄嘌呤脱氢酶在先天性免疫系统中有很多细 胞保护功能，暗示着黄嘌呤脱氢酶基因可能与家蚕抗DNV有某种联 系。 2．通过荧光差异显示技术，在抗DNV的品种秋丰d、高感品种华 八35及其近等基因系BC。中获得了与抗性相关的20多个特异条带。 经过荧光定量PCR验证确认了一个与抗性相关的特异片段，5’一RACE 获得了一个1096bp的全长序列。生物信息学分析后发现该基因是一 II kinaseC 个蛋白激酶C抑制因子基因(proteininhibitor，PKCI)， 命名为BmPKCI，这是该基因首次在家蚕上被克隆出来。蛋白激酶C 抑制因子能够通过多种途径诱导细胞凋亡。由此，提出了BmPKCI在 家蚕抗BmDNV—Z中可能的作用模式。 3．在差异显示实验过程中获得了一个与家蚕EST有高度同源性 的差异片段，通过设计特异引物5’一RACE获得了一个814bp的全长 序列，经分析发现该基因编码225个氨基酸的家蚕肌钙蛋白I蛋白， 存在一个保守的区域，与伊蚊和果蝇的肌钙蛋白1分别有82．6％和84％ 的同源性，而与哺乳动物的同源性很低，与老鼠和人类的同源性都只 有23．5％。 关键词：家蚕，浓核病毒(中国株)，分子标记，FDDRT-PCR，蛋白 激酶C抑制因子，肌钙蛋白I Ill 兰茎叁茎塑圭茎垡熊叁 ABSTRACT insectandthemodelinsectof an economic mori，isimportant Silkworm，Bombyx lead densovimsisakindofharmfulvirusthat to mori may Lepidoptera．Bombyx beenisolatedfrom lossinsericicultural densovirushave serious industry．Three Bombyx mori．BmDNV-Zis similarto isdifferentin characteristics，A very BmDNV02，but serological Nid·1 theresistancetoBmD