抗菌肽Cecropin+B-人溶菌酶融合蛋白基因的设计、克隆在大肠杆菌中的表达.pdfVIP

n 抗菌肽CecropiB一人溶菌酶融合蛋白基因的设计、克隆及在 大肠杆菌中的表达 摘要 抗菌肽(anti-bacterial 产生的一类小分子多肽，是宿主防御病原微生物入侵的重要分子屏障，其生成和 释放是机体炎症反应的组成部分。抗菌肽不仅对革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细 菌具有高效广谱的杀灭能力，而且对某些病毒、真菌和原虫也具有抑杀作用；同 时它对一些肿瘤细胞具有选择性杀伤作用，但对正常哺乳动物和昆虫细胞却无明 显的毒副作用。人溶菌酶(humanlysozyme)具有抗革兰氏阴性细菌和抗一些病 毒的能力。人溶菌酶是人体内的一种蛋白质，和人体具有天然相容性。在临床上 应用时，比其它溶菌酶更安全，没有刺激性和副作用。本实验目的是想通过基因 B和人溶菌酶基因连接至高效的大肠杆菌表达载 重组，以融合的形式将Cecropin 体上并进行表达，进一步探讨融合蛋白的抗菌和抗病毒活性，以期研制出具有更 高活性的抗菌和抗病毒重组蛋白。 B)和人溶菌酶(hLyso)的基因克隆载体，通 为了构建抗菌肽B(Cccropin 过重叠区扩增法人工合成抗菌肽B基因，从pUCll8-hLyso上卸下人溶菌酶基因， 然后按照正确的阅读框架融合并重组至克隆载体中。通过对重组质粒的测序，表 B—human 明融合基因Cecropin 组质粒转入大肠杆菌里，使目的基因能够在大肠杆菌里保存并且大量扩增，为构 B一人溶菌酶奠定了基础。 建表达载体表达融合蛋自抗菌肽Cecmpin 将重组后得到的克隆载体用引物扩增，凝胶电泳后回收目的条带，然后将回 DNA连 收条带和大肠杆菌表达载体pET32a用同样的限制性内切酶切割，用T4 接酶将两者连接。经测序及酶切鉴定融合基因CecropinB一人溶菌酶已经正确的 连接到pET32a上。 B-人溶菌 酶并初步测定了活性。 关键词：抗菌肽；天蚕素B；人溶茵酶；基因克隆：融合蛋白 The and inE．colia Fusion ofNovel Design，CloningExpression Protein B-HumanGene Cecropin Lysozyme Abstract Anti·bacterial akindofsmallsizemolecular peptide(abbrevitatedform-ABP)is thatareencodeda is molecular peptides by specialgene，stillimportant protective screenofthatthehostdefend bacteriainvadefS．These have pathogenic peptides broad ofantibacterialeffectandinhmitDNA ofsomevirus． spectrum