抗体单分子膜的制备传感性能与研究.pdfVIP

抗体单分子膜的制备及传感性能的研究 抗体单分子膜的制备及传感性能的研究 指导教师：冯春梁 教授 研究生：孙越 学科专业：物理化学 研究方向：生物传感器 中文摘要： 利用自组装单分子膜(SAMs)技术，以碳二亚胺和戊二醛为偶联剂和交联剂在金等基 础电投上固定羊抗小鼠IgG抗体，制备电位型无标记免疫传感器。主要进行了如下几方亟的 研究： 1基础电极的选择 首先分别测定了真空蒸镀的金片电极、金圆盘电极、银圆盘电极的电位随时间变化曲线， 结果证明电位信号比较稳定，这些电极可作为电位型免疫传感器的基础电极。然后在上述电 极表面通过自组装单分子膜技术固定抗体，制备免疫传感器，从传感器的检测下限、检测范 围、工作曲线的斜率等角度对传感器进行评价比较，真空蒸镀的金片电极实验结果最好，所 以选择真空蒸镀的金片电极作为本实验的基础电极。 2自组装单分子膜体系的选择 面，制成单分子膜电极，测定它们在醋酸盐缓冲溶液中的平衡电位，‘与裸金电极相比，平衡 电位变化很大，说明三种巯基化合物在金片电极表面上形成了自组膜。通过碳二亚胺偶联剂 在三种自组膜上固定抗体制备免疫传感器，发现巯基十一酸自组膜免疫传感器的灵敏度较 好，检测范围最宽。所以选择巯基十一酸作为碳二亚胺法制各免疫传感器的自组膜体系。又 分别使用碳--W胺偶联法和戊二醛交联法在半胱氮酸自组膜上固定抗体制各免疫传感器。对 比发现，使用戊二醛交联法时，传感器的检测范围较宽。所以对于半胱氨酸自组膜体系使用 戊二醛交联法固定抗体的效果较好。 3抗体(抗原)分子的最佳固定化条件 通过查阅文献及实验室前期j[作确定抗体的固定化条件为300C，pH=5．5。 抗体单分子膜的制备及传感性能的研究 4最佳测试条件的确定 选定25～55C的温度范围，pH4，0～pH7．0的酸度范围进行免疫反应．通过实验结果确 5．5作为免疫反应的最佳实验条件。 定30。C，pH 5SH(CI-12)10COOH自组膜免疫传感器的性能研究 本实验系统研究SH(CHz)t。C00H自组膜免疫传感器性能，电极的检测下限可达0．4ng／mL， HCl可使其再生，电极寿命可达16天。 6半胱氮酸自组膜免疫传感器的性能研究 系统研究半胱氨酸自组膜免疫传感器的性能，得到电极的检测下限为O．05ng／mL，检测 范围为0．05～5ng／mL，相关系数为0．9931。电极的响应时间为14rain，使用甘氨酸盐酸缓冲 溶液可使其再生。 关键词：自组装单分子膜；免疫传感器：抗体：抗原 2 抗体单分子膜的制备及传感一|生能的研完 1前言 传感器是一种信息获取与处理的装置。比如人体的感觉器官就是～套完美的传感系 统，通过眼、耳、皮肤来感知外界的光、声、温度、压力等物理信息，通过鼻、舌感知气味 和味道等化学刺激。生物传感器与此类似，是一类特殊的传感器，是一门由生物、化学、物 理、医学、电子技术等多种学科相互渗透成长起来的高新技术“。1。 自1962年aark和Lyons提出生物传感器的设想以来，随着生物感觉系统作用机制的进 一步阐明，以及近代生物技术、电化学分析技术及微电子技术的飞速笈展，生物传感器的研 究和应用开发取得了长足的进步””。生物传感器具有选择性好、灵敏度商、分析速度快、 成本低、能在复杂的体系中进行在线连续监测等的特点。生物传感器的高度自动纯、微型化 与集成化，减少了对操作环境和使用者技术的要求，适合野外现场分析的需求，在生物、医 学、环境监测、食品、医药及军事医学等领域有着重要的应用价值，己引起世界各国的极大 关注……。 1．1生物传感器简介 1．1．1生物传感器的工作原理 干扰物质 特异性生物敏感膜 图卜1生物传感器的工作原理 3 抗体单分子膜的制备及传感性能的研究 生物传感器由两部分组成：其一是敏感元