磁性二氧化硅载体的合成、表征及其对酶的固定化.pdf

摘 要 固定化酶在化学生物学、生物工程、医学、环境工程及食品工业等学科领域的 研究异常活跃。而固定化酶技术最为关键的是固定化酶载体的选择。与非磁性材料 相比，磁性材料具有一些特殊的优点。本文合成了表面含有氨基和环氧基的两种磁 性二氧化硅载体材料，并分别用这两种材料固定了胰蛋白酶和脂肪酶，同时对固定 化酶的性质进行了研究。 用化学沉淀法合成了磁性四氧化三铁纳米粒(MNP)，粒径为27 nm 左右。以MNP 为核，用四乙氧基硅烷按改进的溶胶-凝胶法合成了核壳式磁性二氧化硅载体(MS) 。 以γ-氨丙基三乙氧基硅烷( γ－APTS)为硅烷偶联剂，在微量水存在下与MS 反应， 在MS 表面修饰上氨基，合成了氨基修饰的磁性二氧化硅载体(AMS) 。衰减全反射红 外光谱显示AMS 在2887 cm-1 和2825 cm-1 有两个吸收峰，-CH -CH -CH -NH 的特 2 2 2 2 征碳氢键伸缩振动吸收峰。XRD 结果表明MNP 、MS 及AMS 中的四氧化三铁均为 磁铁矿型。用振动样品磁力计(VSM)表征其磁学性质，结果表明随四氧化三铁外包裹 的二氧化硅层厚度的增加，饱和磁化强度(Mr)依次下降，分别为 69.1 、57.0 、23.7 emu/g，同时这三种磁性载体的剩磁及矫顽力都较大，表明它们没有超顺磁性。用盐 酸返滴定法测定了AMS 表面氨基含量为0.1454 mmol/g 。应用AMS 固定化胰蛋白酶， 研究了固定化的pH 值，戊二醛的用量等反应条件对固定化酶的影响。结果显示在固 定化反应缓冲溶液的pH 为7.5 ，戊二醛的用量为1%时，固定化酶的效果最好。同时 研究了AMS 固定化胰蛋白酶的各种酶学性质，如最适反应pH 值，固定化酶的热稳 定性，重复操作性等，其中最适反应pH 值比游离酶提高了0.5 个pH 单位；重复使 用性较好，使用8 次之后，剩余活性仍保持了初始活性的76 ％。 表面修饰环氧基的磁性二氧化硅载体材料是一种新的固定化酶的载体材料。以 MNP 为核，以含有环氧基的3-[(2,3)环氧丙氧)]丙基三甲氧基硅烷(GPTMS)为硅烷偶 联剂，在pH=7.0 的水溶液中，用氟离子作催化剂在减压条件下，合成了环氧基修饰 的磁性二氧化硅载体(EMS) 。对所合成的EMS 作了以下表征：衰减全反射红外光谱 I -1 -1 显示在1255 cm 、904 cm 出现了环氧基的特征吸收峰。XRD 表征EMS 中的四氧 化三铁也为磁铁矿型。振动样品磁力计(VSM)测定结果表明EMS 的饱和磁化强度(Mr) 为45 emu/g ，但也没有超顺磁性。用改进的Na S O 滴定法测定了EMS 中的环氧基 2 2 3 的含量为0.1200 mmol/g 。利用EMS 固定化脂肪酶，研究了固定化的pH 值及固定化 温度对固定化脂肪酶的影响。固定化反应缓冲溶液的pH=8.0 ，固定化温度为25 ℃时 固定化酶的效果最好。同时研究了EMS 固定化脂肪酶的各种酶学性质，如最适反应 pH 值，固定化酶的热稳定性，重复操作性等。与游离酶相比，固定化酶的热稳定性 有了较大提高，在60℃下仍保持了40 ％的相对活性；重复使用9 次之后，剩余活性 仍保持为初始活性的 70 ％；固定化脂肪酶的最适反应pH 值比游离脂肪酶提高了 1 个pH 单位。 为了进一步说明EMS 在室温条件下可以通过打开环氧键与酶产生共价键合，本 论文在25℃，pH 8.0 的缓冲溶液中分别用三种载体MS 、AMS 、EMS 固定化脂肪酶， 比较了三种材料固定化脂肪酶的偶联效率，活力回收，相对活力。EMS 固定化脂肪 酶的偶联效率达到90%，活力回收达到60 ％，相对活力达到66 ％，三项指标均优于 另外两种载体，EMS 对脂肪酶的固定化效果最好。 关键词：氨基硅烷偶联剂，环氧基硅烷偶联剂，表面修饰，磁性二氧化硅载体，固 定化酶 II