凋亡相关基因在放线菌素D诱导胃癌细胞凋亡中的作用及在胃癌组织中的表达和临床意义.pdf

兰J”大掌博士掌位韶叩t 中文摘要 目的：许多抗肿瘤化疗药物虽然结构不同、作用机制不同、作用靶点一不同，但都 可能诱导肿瘤细胞的凋亡．本研究通过观察放线菌素D(ActD)对体外培养的胃腺癌 ActD与胃腺癌细胞凋亡的关系和ActD诱导细胞凋亡的分子机制。用基因芯片研究放 线菌素D诱导胃癌细胞凋亡的相关差异表达的基因。同时检测了胃癌组织中 Survivin、Cox一2和HSP一70的表达，探讨三者与胃癌发生发展的可能关系． 基因芯片、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜和电子显微镜等技术检测了ActD对胃癌 BGC一823细胞的诱导凋亡作用及差异表达的基因；RT—PCR观察了用药前后胃癌细胞 相关性及临床意义进行初步探讨。 结果：1．浓度大于5．OXl矿如1／1时，ActD对胃腺癌细胞的生存有显著的影响，并 呈剂量、时间依赖性，随着药物浓度的增高和作用时间的延长，ActD对体外培养的 制作用相似，但是两种类似物和母体相比较，对胃腺癌BGC823细胞生长的抑制率在 各作用时间内，各浓度组中均略低于母体。 101，5．O×10’，1．O×lO’∞l／l 胞术检测发现其主要表现为坏死峰；浓度为I．OX 尤以5．0X104ml／l最为显著，凋亡率分别为8．0％、28．0％、7．8％；当作用时间小于 72h时，仅有5．OX 兰州大掌博士掌位论文 期细胞含量均有不同程度的降低。 形成凋亡小体。 4．1．OX 101mol／1、5．0×10—9tool／1两实验组SurvivinmRNA相对表达水平较对 照组均降低，而且浓度较高组survivinmRNA相对表达水平更低。5．OXlO-9mol／l 浓度实验组Cox-2和HSP70mRNA相对表达水平均明显低于浓度1．OXlO-9mol／1实验 组。 5．ActD处理胃癌BGC一823细胞后，基因芯片筛选出差异表达的基因19条，其 中16条表达上调，3条表达下调。主要是与DNA修复、免疫、凋亡、细胞增殖、信 号转导等多个相关基因的差异表达。 存率之间差异无统计学意义(乃0．05)；单因素Cox回归模型分析结果显示，胃癌浸 润深度、患者性别、淋巴结转移及Cox一2蛋白表达等四因素与患者预后有关，具有 统计学意义(尺0．05)；多因素Cox回归模型分析结果仅见胃癌浸润深度、胃癌患者 性别及淋巴结转移等三因素具有独立的预后意义(尺O．05)：胃癌多因素Cox回归模 型风险函数： 庇O)-【‰◇)】e‘n411xl+o石35x，+0石3时6’ Ⅱ 兰州大掌博士掌位论文 结论：I．高浓度组ActD主要以细胞毒作用对胃腺癌细胞造成直接杀伤致死作用。 对胃癌细胞的生长有显著的抑制作用，且具有时间和浓度依赖性；低浓度组ActD抑 制胃腺癌细胞的生长、增殖，主要通过诱导胃癌细胞发生凋亡来实现，低浓度组ActD 对胃癌细胞生长、增殖的影响与细胞周期有一定关系；低浓度ActD可以使胃癌细胞 共同参与ActD诱导的胃癌细胞凋亡。 细胞的生长抑制作用与母体相似，但抑制率低于母体，提示还需对ActD的结构改造 作进一步研究。 3．ActD可以影响入胃癌B6C823细胞株凋亡等多个相关基因的差异表达。 能主要参与胃癌发生、发展的早期过程：Cox-2和HSP70与胃癌的浸润、转移密切相 关；胃癌浸润深度、患者性别、淋巴结转移及Cox-2蛋白表达等因素与患者预后有 关，而胃癌浸润深度、患者性别及淋巴结转移具有独立的预后意义。 关键词：胃肿瘤，抗肿瘤药物，放线菌素D，类似物，凋亡，PCR，基因芯片，预后， 组织芯片，Survivin，Cox一2，HSPTO，MTT m 兰JH大掌博士掌位论文 In to onthe and order theeffectsofActD of Objective investigate