丁酸钠对人喉癌Hep2细胞增殖、凋亡及其端粒酶活性影响的体内外实验的研究.pdf

郑州大学2007年博十研究生论文 中文摘要 丁酸钠对人喉癌Hep一2细胞增殖、凋亡及端粒酶 活性影响的体内外实验研究 博士研究生 高岭 导 师 董明敏 郑州大学一附院耳鼻咽喉一头颈外科 河南 郑州450052 摘要 喉癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤，位居头颈部上皮源性恶性肿瘤的第2位， 占全身肿瘤的1．2％～1．6％。近年来，世界多数地区喉癌的发病率及死亡率均有明 显增高趋势，严重威胁着人类的健康与生命。虽然近几十年来传统的治疗方式如 手术、放疗、化疗等已有很大改进，提高了患者的5年生存率，但手术治疗往往 严重破坏患者的喉功能而致残；放疗仅对早期喉癌疗效好，对于大多数就诊时即 为中、晚期或治疗后又出现复发、转移的患者往往效果不佳；而化疗又由于其严 重的毒、副作用常使得患者不能耐受治疗，从而使这些治疗方式仍受到极大限制。 因此，积极寻求治疗喉癌的新途径成为广大耳鼻咽喉科研究者面临的新课题。 近年来，随着对肿瘤发生机理研究的不断深入，针对肿瘤发生机制多环节而 起作用的新型抗肿瘤药物不断发展，新的抗癌药物不断应用于临床，但因存在不 少急需解决的问题，其l临床应用前景仍受到很大限制。而以在维持肿瘤的生长中 起重要作用的端粒酶为靶点的端粒酶抑制剂和促进肿瘤细胞凋亡的凋亡诱导剂 等，因其作用机制广泛，潜在的毒性反应较轻，已引起肿瘤研究者的广泛关注。 组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histonedeacetylase 来发现的一类新的靶向抗肿瘤药物，它主要通过调节组蛋白的乙酰化状态来改变 染色质结构，进而引起相关基因转录，使肿瘤细胞的形态和功能发生改变，最终 导致细胞增殖抑制、诱导分化、凋亡以及端粒酶活性抑制等一系列结果而达到治 疗肿瘤的目的。丁酸钠(sodium butyrate，SB)是食物纤维在结肠内发酵过程中 产生的一种无毒的四碳短链脂肪酸，是HDIs中的一类小分子化合物。体外实验证 实，丁酸钠能抑制多种肿瘤细胞增殖，诱导细胞分化和凋亡，并且在诱导凋亡过 ’ ， 郑州人学2007年博lj研究生论文 中文摘璺 程中，还能有效地抑制细胞端粒酶活性表达，具有广泛的抗肿瘤效应。进～步研 究表明，丁酸钠对人前列腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌裸鼠移植瘤均有明显的生长 抑制及诱导凋亡作用，且对机体无明显毒副作用。这些研究结果提示丁酸钠有望 成为一种高效、低毒的凋亡诱导剂和端粒酶抑制剂在肿瘤治疗中发挥作用。目前 对丁酸钠抗肿瘤作用的研究已涉及消化系统、呼吸系统、泌尿生殖系统、神经系 统及骨肿瘤等相关系统肿瘤，但丁酸钠对头颈部肿瘤影响的报道较少，有关其对 喉癌作用的研究，迄今国内、外尚无文献报道。 随着细胞培养方法的发展与普及，应用体外培养的癌细胞寻找新抗癌药物的 研究已逐渐成为最重要的初筛手段之一。Hep一2为人喉上皮样癌细胞系，因其保留 了大部分人喉鳞癌的生物学特性，已被广泛用于喉癌诊断、治疗的体外研究。为 探讨丁酸钠在喉癌治疗中的作用，本研究在体外培养Hep一2细胞的基础上，采用 免疫组化技术、流式细胞术及多种分子生物学技术观察了丁酸钠对Hep一2细胞增 殖、凋亡及端粒酶活性的影响并探讨其发生机制，为药物治疗喉癌拓展新的思路 和方法。 机体内部环境与体外环境有着很大的差异，体外实验结果并不能确切反映药 物在体内对肿瘤的杀伤情况。为进一步明确丁酸钠经体内代谢后对肿瘤的影响， 本研究在体外实验的基础上，以Hep一2细胞株建立人喉癌裸鼠皮下移植瘤模型，应 用适当浓度的丁酸钠进行分组治疗实验，观察丁酸钠的抑瘤作用以及荷瘤裸鼠的 毒性反应，并探讨其发生机制，为药物的开发、应用提供有价值的实验依据。本 研究分为以下三部分。 第一部分丁酸钠对人喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡的影响 方法 1．采用四甲基偶氮唑蓝(methylthiazolyl 后Hep一2细胞增殖活性的改变，并于倒置显微镜下观察细胞形态变化。