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模板来自于 * 模板来自于 * 聚谷氨酸的发酵生产和分离提取的工艺研究 课题背景及目的意义 菌种的分离与发酵 产物的提取与鉴定 菌种的鉴定 目 录 CONTENTS 01 PART ONE 课题背景及目的意义 聚谷氨酸的发现，结构特性及其应用 γ-PGA最早发现于1937年，研究人员在炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis）的细胞荚膜以及糖化菌（Bacillus mesentericus）的细胞荚膜中发现γ-PGA。之后在枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis )以及纳豆杆菌（Bacillus natto )中也发现了γ-PGA。 γ-PGA聚谷氨酸是一种特殊的阴离子自然聚物，是L-Glu和D-Glu以α - 氨基 和γ - 羧基之间经酰胺键的形式 缩合而成的高分子聚合物。γ-PGA的分子量一般在50kDa到2000kDa（100~1000kDa）。其保湿锁水功效是透明质酸的500倍 聚谷氨酸（γ-PGA）简介 poly-γ-glutamic acid 土壤级聚谷氨酸 聚谷氨酸水胶 A 对人体和环境无毒可生物降解，生态友好型 C 水溶性，可得到无味清洁透明的溶液 B 易交联形成后期拥有卓越性能的水凝胶 D 可制成钠，钙，镁，氢型 γ-PGA的特性 01 增加抗冻性，食品冷藏 增加抗溶性 增加钙及其他矿物质吸收 抗氧化 食品方面 03 保健品添加剂，促进钙质吸收 具有良好的生物亲和性和生物降解性，可用作药物载体 医药方面? 02 作为植物增产营养素 超强亲水性与保水能力，可作为肥料增效剂，并增加植物抗病能力 平衡土壤酸碱度 可结合沉淀有毒重金属 农业方面? 04 污水处理，如重金属吸收剂或螯合剂 卫生用品，婴儿尿布及妇女卫生巾等 保湿作用，用于化妆品 其他方面 γ-PGA的应用 02 PART TWO 菌种的分离与发酵 产γ-PGA的菌株，菌种的筛选，培养基 L-Glu 依赖型 这类菌种主要有 B.anthracis、B. subtilisMR-141 、 B. licheniformisATCC9945 、 B. licheniformisATCC9945a、B. subtilis IFO3335、 B. subtilisF-2-01 和 Madla 和 Prasertsan 等[9]从温泉中筛选出的B.thrmotolerant WD90.KT12.KF.41等 非 L-Glu 依赖型 这类菌种主要有B.subtilis5E、B. subtilisvar. polyglutamicum 、 B. licheni-formisA35 、 B.subtilis TAM-4 等。 产γ-PGA的菌株 能发酵生产γ-聚谷氨酸的菌种较多，有地衣杆菌、枯草芽孢杆菌等菌种，而以枯草芽孢杆菌发酵生产γ-PGA的研究居多。 根据细胞生长的营养要求是否需要L-谷氨酸可以把γ-PGA产生菌分为两大类 ①B. licheniformis9945a 发酵生产 γ-聚谷氨酸 1942 年发现 B. licheniformis9945a 能够生产γ-PGA，接着相关培养基设计和发酵条件优化的研究相继展开。研究表明，盐浓度、L-Glu、甘油和柠檬酸是生产 γ-PGA 的主要影响因素，Mn2+和 Ca2+对γ-PGA的产生也有显著影响。最优培养基组成如下：柠檬酸12 g/L，甘油 80 g/L，NH4Cl 7 g/L，MgSO4 0.5g/L，FeCl3 0.04 g/L，K2HPO4 0.5 g/L，pH=7.4。2～3 天培养后， γ-PGA的产量为15g/L。B. licheniformis9945a 在此培养条件下，产量较低，可能是由于没有找到最适的碳氮源、生长因子等。在随后的研究中，产量高于15 g/L。 ② B. subtilis IFO3335 发酵生产 γ-聚谷氨酸 B. subtilis IFO3335 是从一种传统的日本食品“纳豆”中分离出来的，是一种 L-Glu依赖型菌株。外源的L-Glu仅仅是作为γ-PGA合成酶的激活剂，而用于合成 γ-PGA 的谷氨酸则是 TCA 循环的中间代谢物。利用这种细菌发酵生产 γ-PGA，产量随培养条件的不同而不同，其范围为20～50 g/L。典型的培养基组成为：L-Glu 30 g/L，柠檬酸 20 g/L，硫酸铵 5 g/L，培养周期96 h。这个菌株以外源的L-Glu 作为合成 γ-PGA 的激活剂，而合成 γ-PGA 的主要前体来源于 TCA 循环，因此，可以尝试直接加入 TCA 循环中间代谢物，考察 γ-PGA 的产量，选出最佳前体添加物，以进一步提高产量。 ③ B.subtilis