《BMP4诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的研究 Study on Differentiation of Chicken Embryonic Stem Cells to Male Germ Cells by BMP4》.pdfVIP

畜牧兽医学报2013，44(11)：1749—1757 ActaVeterinariaet Sinica Zootechnica BMP4诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞 分化的研究 施青青，张振韬，李鹏程 ，郑蒙蒙，王丹，黄晓梅，张亚妮，李碧春。 (扬州大学动物科学与技术学院，江苏省动物繁育与分子设计重点实验窒，扬州225009) 摘 要：旨在探讨BMP4诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的作用机理。采用单层贴壁培养作为分化模式， 分别采用10、20、30和40 BMP4浓度诱导雄性鸡胚胎干细胞，通过形态学、荧光定量PCR和免疫细胞化 ng·mL_1 学检测诱导效果。根据细胞形态变化和差异基因表达量变化，确定了BMP4的适宜诱导浓度为40ng·mL～。在 适宜浓度诱导过程中，诱导4d类胚体开始出现，6～8d类胚体逐渐增大，数量增多，10d部分类胚体开始散开，变 为小的圆形细胞，12d在散开后的类胚体周围可观察到少量生殖样细胞，14d生殖样细胞数目增多，且呈聚团生长 的趋势。诱导过程中相应基因表达量也发生变化：胚胎干细胞标记基因Nanog、Sox2表达量显著下降(P0．01)， 生殖细胞特异基因Stra8、Dazl、integrin 相应基因的表达，促进雄性鸡胚胎于细胞向雄性生殖细胞方向分化，结果为雄性生殖细胞的体外诱导研究提供试 验参考，为进一步研究雄性生殖细胞发生和调控机制提供理论基础。 关键词：鸡胚胎干细胞；雄性生殖细胞；分化；BMP4 中图分类号：$831．2；Q254文献标志码：A 文章编号：0366—6964(2013)11—1749—09 on of DifferentiationChicken StemCellsto Study Embryonic MaleGermCellsBMP4 by SHI ZHANG Zhen-tao，LI Dan， Qing-qing， Peng-cheng，ZHENGMeng-meng，WANG HUANGXiao-mei，ZHANGYa_ni，LIBi—chun’ Animal andMolecular Province， (KeyLaboratoryof BreedingReproduction DesignforJiangsu AnimalScienceand 225009，China) Collegeof Technology，YangzhouUniversity，Yangzhou effect of Abstract：This the ofBMP4ondifferentiation stemcells studyinvestigated embryonic (ESCs)tomale cells．Adherentculture wasusedasadifferentiation germ monolayersystem ESCswereculturedinconcentrationsof todiffer— mode，maleness 10，20，30，40