《产高效细菌素乳酸菌的筛选及鉴定》.pdfVIP

Production 2013年鬻49檄鬻19期 髓物生产·Animal 产高效细菌素乳酸菌的筛选及鉴定 杨亚晋，付文娟，刘旭辉，郑召君，张日俊+ (中国农业大学动物科技学院，动物营养学国家重点实验室，北京100193) 摘 要：本研究旨在从自然生境中筛选产高效抑茵蛋白的乳酸茵，并进行抑茵活性分析和茵种鉴定。通过牛津 杯法抑菌试验对样本中乳酸茵进行初筛，然后对发酵液进行排除酸、过氧化氢干扰和蛋白酶处理。进一步复筛 出产抑茵蛋白的乳酸茵。通过形态学、生理生化、糖发酵(API)和16SrDNA基因序列同源性分析进行菌种鉴定。 结果表明：本研究成功地筛选出2株对金黄色葡萄球菌、单增李斯特茵等致病菌有高效抑制作用的乳酸茵(抑 茵圈直径均20 mm)，证明其抑菌物质为蛋白类物质并推测为细菌素，菌种鉴定为植物乳杆茵和粪肠球茵。本 试验对高效细菌素一乳酸茵的研究为食品及饲料行业中乳酸菌素的开发和应用提供参考。 关键词：乳酸茵；细菌素；筛选鉴定；抑茵活性 中图分类号：$201．3 文献标识码：B 文章编号：0258—7033(2013)19—0072一05 畜牧生产中抗生素滥用、病源微生物耐药性等 问题严重威胁着食品安全及人类健康，越来越多的 cvccl599)；金黄色葡萄球菌(S．t21zle115cvcc26003)；藤 研究致力于寻找新型安全有效的绿色饲料添加剂作 黄八叠微球菌(S．1utea 为理想的抗生素替代品。细菌素是细菌在生长过程 cvcc541)；培养基 cvcc245)；沙门氏菌(S．typhimurium 中通过核糖体途径合成并分泌到环境中的具有抑菌 (MRS、BPY、LB等)，药品采用国产分析纯；细菌基因 作用的蛋白或多肽物质，具有高效、无毒、耐高温、 组DNA提取试剂盒(北京天根生化有限公司)； 无残留、无抗药性等优点川。目前国内外对细菌素的 Products Analytic 研究主要集中在芽孢杆菌和乳酸菌上，乳酸菌是一 类可发酵碳水化合物、产生大量乳酸(50％)的革兰 7。 氏阳性球菌或杆菌的统称【21。饲料中添加乳酸菌制 1．2产抑菌物质乳酸菌的初筛乳酸菌的分离与 剂可以促进动物胃肠道微生态平衡，改善动物健康[3】。 培养：将收集的样本悬浮于无菌生理盐水中按梯度 我国《饲料添加剂品种目录(2010)》中允许添加的29 稀释，涂布于含溴甲酚紫指示剂(0．01％)的MRS琼 种微生物菌种中有9种属于乳酸菌属。添加植物乳 脂平板上，37。C培养箱培养48h，挑选培养基变黄的 杆菌的发酵饲料中粗蛋白、粗脂肪含量明显上升，提 菌落划线纯化，选取镜检革兰氏染色阳性、无芽孢的 高饲料利用率【41。Riboulet等【5】研究表明，乳杆菌素菌株于MRS液体培养基中37℃培养12h作为种子 液。种子液按2％接种于新的MRS液体培养基37℃静 Abpll8对小鼠和猪的肠道沙门氏菌等致病菌有显著 的抑制作用并影响动物机体免疫力。因此对乳酸菌 000 置培养36h作为发酵液。以8 r／min离心10min， 细菌素抑菌能力的挖掘成为开发绿色饲料添加剂的 取上清液备用。 重点。本试验旨在筛选出对病原菌有高效、广谱抑 指示菌的制备：选取的4株指示菌中大肠杆菌用 菌活性的产细菌素乳酸菌菌株，并对其进行菌株鉴 LB培养基，其余用BPY培养基，种子液按2