《PNP-CD融合自杀基因系统对肝癌细胞杀伤作用的实验研究》.pdfVIP

·624· 实验研究 PNP—CD融合自杀基因系统对 肝癌细胞杀伤作用的实验研究 彭友缘严武 蔡晓坤 尹震宇 【摘要】 目的 分析PNP-CD融合自杀基冈系统对肝癌细胞HepG2的杀伤作用并探讨其可能 的机制。方法利用重组PCR定点诱变法制备融合基因PNP—CD。将PNP—CD插入真核表达载体 pcDNA3．Q中。构建融合自杀基因表达载体pcDNA3．O／PNP—CD。经酶切、PCR及测序鉴定重组体， G418筛选获得稳定转染pcDNA3．0／PNP—CD的抗性细胞克隆。用RT—PCR和WesternBlotting法 检测PNP—CD基因在HepG2细胞中的表达。用台盼蓝排斥法检测细胞生长曲线，用MTT法检测细 胞细胞克隆对相应前药敏感性及所导致的旁观者效应。结果 融合基因片段PNP-CD正确插入了 pcDNA3．0中。pcDNA3．0／PNP-CD在HepG2细胞中实现了表达。细胞抗性克隆对特定的前药高度 敏感。在两种前药联合作用下，pcDNA3．0／PNP—CD所致旁观者效应明显强于只给予MeP—dR一种 前药所致旁观者效应。结论具有双自杀基因功能的PNP—CD融合基因系统是肝癌基因治疗中一 种高效治疗载体，对肝癌细胞有着良好的杀伤作用。 【关键词l癌。肝细胞；PNP／MeP—dR系统；CD／5-FC系统；融合自杀基因； 基因治疗 effectsof chimeric vectorOilHCCcellsPENG PNp-CD suicide Wu，cA， Killing gene You—yuan。yAN Xiao-kun，YlN Xiamen Zhen—yH．DepartmentoJHepatobiliarySurgery，ZhongshanHospitalof 361004，P．R．China University。Xiamen To the effectsandmechanismofPNP—CDchimeric [Abstract]Objectiveinvestigatecytotoxic vector fromPNP／MeP—dRonHCCcells．MethodsThefusionsuicide gene originated system gene wassubclonedinto tOconstruct PNP—CDobtainedsitedirected a by mutagenesistechnique peDNA3．0 vector achimeric identified eukaryoticexpressioncontaining gene，peDNA3．0／PNP—CD．Afterbeing recombinant and wastransfectedinto cells by enzyme，PCRsubsequentsequencing，it HepG2bylipo— some-mediationG418一resistantcellularclonewithstabletransfectionof method．The pcDNA3．0／ was was establishedselection．TheofPNP—CD also P