酶法合成低聚乳果糖的工艺的研究.pdf

㈣㈣帅Ⅲ㈣Ⅷ…㈣ Y1746886 摘要 摘要 能性低聚糖，具有一系列的生理功能，如低热量，难消化、促进双歧杆菌增殖， 抑制致病菌产生、抗龋齿作用、调整肠道功能、降血脂、降胆固醇、促进矿物 质吸收功能等，发展前景巨大。在我国，低聚乳果糖的研究可以说是刚刚起步。 其产业化在国内一直未见报道，原因是在生产中酶的活力和糖的纯化制约了其 在国内的发展。本课题拟研究微生物酶法合成低聚乳果糖的工艺条件，确定低 聚乳果糖的最佳合成方案，并对低聚乳果糖的脱色，纯化进行初步研究，为以 后的工业化生产提供技术参数。本文的主要研究结果和结论归纳如下： 1．确定俨呋喃果糖苷酶粗酶液合成低聚乳果糖的最佳工艺条件。方法：以 蔗糖和乳糖为底物，利用俨呋喃果糖苷酶粗酶液合成低聚乳果糖，通过单因素 和Box．Behnken实验，对酶法合成工艺进行响应面分析，得到酶法合成低聚乳 果糖的最佳工艺参数。结果：最佳工艺条件如下：反应时间为22h45min，pH值 为7．O，反应温度为35℃，底物浓度为20％，底物与酶的体积比为1：1(酶活为 糖苷酶法合成低聚乳果糖工艺，模型可靠，方法可行。 2．确定低聚乳果糖的活性炭脱色工艺。方法：神经网络和遗传算法相结合 对脱色过程中的脱色率和回收率进行优化。用均匀设计的数据建立神经网络模 型，输入层为活性炭用量、脱色时间和脱色温度，输出层为脱色率和回收率， 再利用遗传算法对网络进行多目标寻优，得到Parcto最优解。结果：Pareto最优 74．22-78．90℃。验证试验的实际测量值为脱色率94．85％，低聚乳果糖回收率为 97．23％，实际值和预测值的相对误差分别为1．51％和0．12％。结论：神经网络结 合遗传算法优化低聚乳果糖脱色工艺，模型可靠，方法可行，达到较理想脱色 效果。 3．对酶法合成的低聚乳果糖混合糖液进行初步纯化。方法：通过乳糖结晶 和离子交换法对低聚乳果糖进行了初步纯化，对乳糖结晶的部分工艺条件和离 子交换法的部分工艺条件进行了初步探索。结果：最佳工艺条件如下：低聚乳 果糖混合溶液浓缩至25％，加入乳糖晶种放置于4℃的冰箱中2天，取出， 4500r／min离心20min，得上清液；再经过离子交换法纯化，纯化条件为进样量 摘要 为5mL，柱温为常温，洗脱流速为2mL／min，柱长水平选择为5m。经初步纯化 后，混合糖液中低聚乳果糖含量从18．26％提高到41．62％。结论：低聚乳果糖混 合糖液经乳糖结晶和离子交换法初步纯化，含量从18．26％提高到41．62％。 4．建立了适合中小企业低聚乳果糖工业化生产过程中的实时检测方法。方 法：薄层分离和苯酚硫酸法相结合，正丁醇：冰乙酸：水=8：3：1，显色剂：苯胺 一二苯胺一磷酸，条带点样，点样量为51al。结果：薄层层析可将低聚乳果糖反应 液中单糖至三糖各组分分开，并首次用薄层色谱证明了酶法合成的低聚乳果糖 样品中果糖的存在，通过苯酚硫酸法分析低聚乳果糖，线性范围为 RSD为3．07％。结论：以薄层层析一苯酚硫酸法检测食品或大豆低聚糖中棉籽糖 含量，测定结果与HPLC法对照，相对误差为3．22％，可用于工业化生产过程中 的检测。 关键词：低聚乳果糖；酶法合成；脱色；纯化；检测 II Abstract Abstract akind offunctional hasa of as range functions，such oligosaccharide．It physiological the