济宁青山羊多胎性状候选基因的研究.pdf

摘 要 本研究借鉴绵羊多胎主效基因研究的成果，利用生物信息学和分子生物学技术，克隆山羊多 胎性状候选基因GDF9和BMPl5，并检测基因突变，分析其与济宁青山羊多胎性能的关系，为济 宁青山羊高繁殖力的标记辅助选择和多胎山羊育种提供理论依据。 1、山羊GDF9基因全长的克隆与序列分析 以发表的绵羊GDF9序列为基础，设计8对引物，采用PCR技术从山羊基因组中直接扩增 对，DNA的同源性分别达到97％和94％，编码序列同源性分别达到99％和96％，氨基酸序列同源 性分别达到98．6％和95．58％。 2、应用PCR．SSCP技术分析山羊GDF9基因外显子SNPs 点使蛋白质第240位氨基酸残基由由缬氨酸变为丙氨酸，A959C突变位点使第320位氨基酸残基 由谷氨酰胺变为脯氨酸，G1189A突变位点导致第397位氨基酸残基由缬氨酸变为异亮氨酸。 3、应用LDR技术分析山羊GDF9基因多态性及其对产羔数的影响 个突变位点的群体检测，适合性矿检验结果表明除白山羊在A959C突变位点处于非 态。比较四个位点在三个品种中的基因型频率分布，济，j。青山羊与沂蒙黑山羊之间，四个位点均 没有显著差异，而济宁青山羊和鲁北自山羊之间，四个位点均有极显著差异伊0．01)，鲁北白山 位点，二者没有显著差异。 利用SAS软件GLM过程对四个位点的的基冈型效应和产羔数进行了最小二乘分析，结果表 明C183A突变对济宁青山羊和鲁北白山羊产羔数没有显著影响。但对单胎品种沂蒙黑山羊的产 突变和A959C突变对济宁青山羊、鲁北白山羊、沂蒙黑山羊的产羔数均没有显著影响。G1189A 突变对济宁青山羊产羔数没有显著影响，对鲁北白山羊产羔数有显著影响俾0．05)，各基因型效 GG(1．0781)。 4、山羊BMPl5基因全长的克隆与序列分析 以发表的绵羊、牛的BMPl5基因序列为基础，设计9对引物，采用PCR技术从山羊基因组 基酸序列同源性分别达到98％和97％。 5、应用FoCSGE技术分析山羊删5外显子SNPs 根据山羊BMPl5基因序列设计一对引物横跨整个第一外显子，设计两对引物覆盖第二外显 sensitive conformation gel 子，应用荧光．构象敏感凝胶电泳(fluorescence．based electrophoresis， 丝氨酸变为苷氨酸，在编码区没有发现其它突变。 6、应用LDR技术分析山羊BMPl5基因多态性及其对产羔数的影响 突变位点的群体检测，三个品种均检测到脚J5基因突变的三种基因型，经卡方检验，鲁北白山 山羊和鲁北白山羊中，G为优势等位基因，而在沂蒙黑山羊中A为优势等位基因。 分析，结果表明BMPl5突变位点的基因型对济’j。青山羊产羔数没有显著影响，但对鲁北白山羊 产羔数较多，可以做为多胎分子标记。对沂蒙黑山羊的产羔数也有显著影响伊0．05)，同样是含 有G等位基冈的个体产羔数多。 7、 应用LDR技术分析山羊心凹基因多态性及其对产羔数的影响 变位点的群体检测，发现济宁青山羊和鲁北白山羊存在心扭基因突变，在两个品种均检测到三种 而鲁北白山羊不符合Hardy．Weinberg定律。在单胎品种沂蒙黑山羊朱检测到FecB基因突变。 基因突变位点的基因犁对济宁青山羊和鲁北白山羊产羔数均没有显著影响。对鲁北白山羊产羔数 AA(2．5061)，这一点和FecB基因对Booroola的影响模式相似。 BMPl5LDRF-CSGE 关键词：山羊GDF9 ABSTRACT Basedontheresultsof on relationof and majorgenesheepprolificacy,theprolificacymajorgene of werestudied informaticsandmolecule prolificacycapability