资料-多糖含量测定各种方法优缺点.docVIP

苯酚-硫酸法测多糖含量 一、原理 多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。试剂 　　1浓硫酸：分析纯，95.5% 　　280%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。 　　36%苯酚：临用前以80%苯酚配制。（每次测定均需现配） 　　4标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）或分析纯葡萄糖。 　　515%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。 　　65%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。 　　76mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。 86mol/L 盐酸操作 　　1制作标准曲线准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。 　　2样品含量测定 　　取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离